丽格海棠叶片再生体系的建立

王禹，于非，谭巍，刘万达

(黑龙江省农科院园艺分院，哈尔滨150069)



丽格海棠叶片再生体系的建立

王禹，于非，谭巍，刘万达

(黑龙江省农科院园艺分院，哈尔滨150069)

以丽格海棠品种巴克斯(Barkos)的叶片为外植体，研究光照强度和时间、植物生长调节剂对不定芽诱导的影响；植物生长调节剂对不定芽增殖的影响；组培苗生根的最佳培养基。结果表明：丽格海棠叶片的最佳不定芽再生培养基为MS + 1mg/L TDZ + 0.1 mg/L 2,4-D或MS + 1mg/L 6-BA + 0.1mg/L TDZ，给予40d弱光培养可促进不定芽再生，再生率可达88.3%；不定芽最佳增殖培养基为 2mg/L 6-BA +0～0.1 mg/L NAA，组培苗最佳生根培养基为 MS + 0.1～0.3 mg/L IBA。

丽格海棠；不定芽再生；增殖系数；生根

丽格海棠又名玫瑰海棠，为秋海棠科秋海棠属的多年生草本花卉[1]，在世界栽培广泛，是我国近几年冬春季市场上的主要盆栽花卉。丽格海棠是球根海棠和野生秋海棠的杂交品系[1]，花色艳丽,花形优美，花期可长达半年之久，是具有较高的观赏和经济价值的室内花卉，开发前景极其广阔[2]。

丽格海棠开花后结籽少，种子发芽率很低, 繁殖不易且成本高；茎段扦插成活率与繁殖系数低, 种质退化严重[1-2]。组织培养繁殖系数高、生长周期短，可在短时间内获得大量无毒苗木，使生产成本降低，为商品化生产提供优质种苗。本试验通过研究丽格海棠叶片诱导不定芽、不定芽增殖、组培苗生根的适宜培养基和培养条件，建立丽格海棠离体叶片再生体系，为提高丽格海棠商品化生产效率提供技术支持。

1 试验材料

2 实验内容与方法

2.1 不同生长激素对不定芽诱导的影响

将采集的叶片自来水流冲洗20min，置于超净工作台中，酒精消毒20s，蒸馏水冲洗2次，0.1%的升汞消毒5min，蒸馏水冲洗2次，沿着主叶脉方向切成1cm×1cm大小的叶片组织，接种到不定芽再生培养基上，生长激素采用TDZ、6-BA、2，4-D。将接种完的叶片置于弱光条件下(不开补光灯)，培养40d，分别调查不定芽再生情况。

2.2 光照强度及时间对不定芽诱导的影响

不定芽再生培养基采用MS + 1mg/L TDZ + 0.1 mg/L 2,4-D，暗培养10d后光照培养30d；弱光培养10d后光照培养30d；弱光培养20d后光照培养20d；弱光培养40d，分别调查不定芽再生情况。

2.3 不同生长激素对不定芽增殖的影响

将不定芽从叶片切下，切成直径不超过2cm的丛状，转接到增殖培养基上，生长激素采用6-BA、NAA，分别调查不定芽增殖情况，每30d继代1次。

2.4 不同生长激素对组培苗生根的影响

选取3cm高的组培苗，切成直径不超过1cm的丛状，转接到生根培养基上，生长激素采用IBA、NAA，分别调查组培苗生根情况。

3 结果与分析

3.1 适宜不定芽诱导生长激素筛选

对于通过直径为149.2 mm的井眼，设计理论扩孔直径为173.4 mm的扩孔钻头，其领眼段直径为120.65 mm，可计算出刀翼扩孔角为58.89°。通过对阶梯扩孔段刀翼进行钻压分级优化，取优化钻压分配比为0.34，阶梯效应指数为1[8,10]，可得一级扩孔直径为140.87 mm，二级扩孔直径为173.4 mm。

表1 生长激素对不定芽诱导的影响

从表1得出随着TDZ浓度的升高不定芽产生速度加快，再生比率也增高，但当TDZ浓度达到2 mg/L时，不定芽出现褐化现象，且随着浓度升高越来越严重；6-BA和TDZ同时使用，TDZ浓度达到0.2 mg/L时，不定芽出现褐化现象；随着2,04-D浓度的升高，叶片产生的愈伤越来越多，且不易分化出不定芽。综合以上因素，丽格海棠叶片的最佳不定芽再生培养基为MS + 1mg/L TDZ + 0.1 mg/L 2,4-D或MS + 1mg/L 6-BA + 0.1mg/L TDZ。

3.2 适宜不定芽诱导光照强度

表2 光照强度对不定芽诱导的影响

从表2得出弱光培养20d后光照培养20d或弱光培养(不开补光灯)40d都有利于诱导丽格海棠不定芽的再生，生产上建议使用40d弱光培养可降低生产成本。

3.3 适宜不定芽增殖生长激素筛选

表3 生长激素对不定芽增殖的影响

从表3得出随着6-BA浓度的增高不定芽分化速度加快和增殖倍数提高，但6-BA浓度达到3mg/L时，芽生长势减弱；随着NAA浓度的提高易生成根，根生成后不定芽增殖速度减慢，因此，丽格海棠不定芽增殖的最佳培养基为2mg/L 6-BA + 0～0.1 mg/L NAA，增殖系数可达5.8。

3.4 适宜组培苗生根生长激素筛选

表4 生长激素对组培苗生根的影响

从表4得出IBA浓度的升高对丽格海棠组培苗生根有促进作用，但IBA浓度达到0.3 mg/L以上，对组培苗生长有抑制作用。因此，组培苗生根可选用0.1～0.3mg/L IBA，可添加0.1mg/L NAA促进组培苗生长。

4 结论与讨论

丽格海棠叶片的最佳不定芽再生培养基为MS + 1mg/L TDZ + 0.1 mg/L 2,4-D或MS + 1mg/L 6-BA + 0.1mg/L TDZ，给予40d弱光培养可促进不定芽再生，再生率可达88.3%；40d后将不定芽从叶片切下，切成直径不超过2cm的丛状，接到增殖培养基上，培养基为 2mg/L 6-BA + 0～0.1 mg/L NAA，增殖系数可达5.8，根据实际需要可继续增殖，每30d继代1次；选取长成3cm高的组培苗，切成直径不超过1cm的丛状，转接到生根培养基上，培养基为 MS + 0.1～0.3 mg/L IBA，组培苗生根且长成5cm高时可驯化。

从实验得出高浓度的细胞分裂素对不定芽再生和增殖有促进作用，但会导致芽生长不良；高浓度的IBA对丽格海棠组培苗生根及生长有促进作用，但会导致组培苗生长不良，因此，在生产中应结合不定芽和组培苗生长势而调节激素浓度。实验还得出在不定芽诱导过程中，弱光培养20d后光照培养20d或弱光培养(不开补光灯)40d都有利于诱导丽格海棠不定芽的再生，但生产中应以降低生产成本为主，选用40d弱光培养。丽格海棠组培苗叶片和茎较脆，在生根时建议切成丛状，利于生根和驯化。

[1]张瑞越,季勤,李燕.培养及接种方式对丽格海棠组培快繁的影响[J].淮阴师范学院学报(自然科学版),2009,8(3):246-249.

[2]曹福亮,陈颖,桂仁意.丽格海棠组培快繁技术体系的建立及优化[J].林业科技开发, 2009,23(5):82-84.

[3]任启闯.丽格海棠离体快繁技术的研究[D].合肥：安徽农业大学,2008.

[4]文锦芬,邓明华,施卫省,等.丽格海棠离体培养植株再生关键技术的研究[J].昆明理工大学学报(理工版),2006(2):111-113+124.

[5]韩超.丽格海棠组织培养技术体系研究[D].保定：河北农业大学,2005.

[6]张云峰,李静,邢宇俊,等.丽格海棠再生体系建立的研究[J].安徽农业科学,2007(3):663-664.

[7]达克东,张松,姜璐琰,等.丽格海棠离体叶片培养不定芽发生和微繁研究[J].山东农业大学学报(自然科学版),2002(1):93-95.

[8]耿明清.丽格海棠叶片的组织培养[J].辽宁师专学报(自然科学版),2012(1):99-101.

[9]陈林晶,张熹涛,曹玉凤,等.丽格海棠组织培养技术的研究[J].北方园艺,2012(22):122-124.

Rieger Bego Leaves the Establishment of Regeneration System

Wang Yu, Yu Fei, Tan Wei,Liu Wanda

(Horticultural Sub-academy of Heilongjiang Academy of Agriculture Sciences, Harbin 150069)

In this experiment, the explants is Rieger Bego (Barkos) of leaves, we study the light intensity and plant growth regulator on influence of the adventitious bud induction; Plant growth regulator effects on adventitious bud proliferation and rooting of tissue culture seedling. The results show that the Rieger Bego optimum adventitious bud of leaves regeneration medium for MS + 1 mg/L TDZ + 0.1 mg/L 2, 4-D or MS + 1 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L TDZ, weak light training can promote in vitro shoot regeneration in 40d, regeneration rate is 88.3%; Best adventitious bud proliferation culture medium for 2 mg/L 6-BA + 0-0.1 mg/L NAA; The best rooting culture medium for MS + 0.1-0.3 mg/L IBA.

Riegerbego; Adventitious bud regeneration; Proliferation coefficient; Rooting culture

图1 丽格海棠叶片不定芽再生

图2 丽格海棠不定芽增殖

图3 丽格海棠组培苗生根

图4 丽格海棠组培苗

2016-09-11

黑龙江省农业科技创新工程项目(ZDO27)

王禹(1982-)，女，硕士研究生, 助理研究员，从事植物组织培养的研究，E-mail:liuwanda1982@126.com。

S682

A

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2017.01.002