HPLC法测定肝达康胶囊中芍药苷的含量

党贵玲 董蕙 杜洪亮 张文世 张景平 张晓雪

130062吉林省医疗器械检验所(长春)1

130051长春市中心医院2

HPLC法测定肝达康胶囊中芍药苷的含量

党贵玲1董蕙1杜洪亮1张文世1张景平1张晓雪2

130062吉林省医疗器械检验所(长春)1

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目的：建立肝达康胶囊中芍药苷含量的高效液相检测方法。方法：Agilent HC-C18柱；乙腈-水(15：85)为流动相；检测波长230 nm；柱温30℃；流速0.8 mL/min。结果：芍药苷进样量在0.072 7～0.654 μg范围内峰面积积分值与进样量呈良好线性关系，平均加样回收率99.4%。结论：该方法易于操作，结果准确，重现性良好，可用于肝达康胶囊质量控制。

高效液相色谱法；肝达康胶囊；芍药苷

肝达康胶囊系具有疏肝健脾、化瘀通络功能的复方制剂，用于肝郁脾虚血瘀所致的胁痛腹胀、胁下痞块、疲乏纳差、大便溏稀及慢性乙型肝炎见上述症状者。收载于国家药品标准[1]，原标准中白芍的含量测定，供试品前处理步骤十分繁琐。本研究对供试品制备方法进行修改，未经正己烷脱脂和中性氧化铝柱净化的样品仍可以得到较好的色谱分离，且含量测定准确度较原方法高，为肝达康胶囊质量标准的改进积累了实验数据。

仪器与试药

岛津UV2550紫外可见分光光度计；Agilent 1100 series高效液相色谱仪；试剂：乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯；芍药苷对照品，批号111736-201035，购自中国药品生物制品检定所。样品为肝达康胶囊3批(批号：1003001、1005001、1007001)。

含量测定

色谱条件：色谱柱：Agilent HC-C18 (250×4.6 mm，5 μ)；流动相为乙腈-水(15:85)；检测波长230 nm；柱温30℃，流速0.8 mL/min。理论塔板数以芍药苷峰计算，应不得低于3 500。

溶液的制备：①对照品溶液制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每l mL中含35 μg的溶液。②供试品溶液制备：取本品装量差异项下的内容物，研细，取0.6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，称定重量，超声处理30 min(功率250 W，频率50 Hz)，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

测定方法：吸取对照品及供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪进行测定。

空白试验：采用相同的工艺制成无芍药苷的阴性对照品，采用相同的方法进行测定，测定结果显示，在芍药苷色谱峰相应保留时间处，未检测出干扰峰，见图1。

线性关系考察：取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.075 3 mg的溶液(纯度96.5%)。精密吸取上述溶液1 μL、3 μL、5 μL、7 μL、9 μL，分别注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线。测得回归方程Y=1 466.85X+24.88(r= 0.999 4)；说明芍药苷进样量在0.072 7～0.654 μg范围内呈良好的线性关系。

图1 HPLC色谱图

表1 回收率试验结果

稳定性试验：取供试品溶液10 μL (批号：1003001)，分别在0 h、12 h、15 h、63 h，依法测定，按芍药苷面积计算RSD为0.64%，结果未发生明显变化，表明供试品溶液稳定。

精密度试验：取同一供试品溶液(批号：1003001)，连续进样6次，测得峰面积积分值RSD为0.69%，结果表明，本方法所用仪器精密度良好。

重复性试验：取同一供试品(批号：1003001)6份，依法独立测定，结果芍药苷平均含量3.432 mg/g，RSD 0.60%，说明可重复性良好。

回收率试验：取经同法测定的已知含量的样品(批号：1003001，含量3.432 mg/g)6份，每份0.3 g，精密加入芍药苷对照品溶液(每1 mL含芍药苷0.016 7 mg) 50 mL，依法测定，计算回收率，测定结果见表1。

样品含量测定：依法测定样品3批，批号为1003001、1005001、1007001，含量分别为1.03 mg/粒、1.12 mg/粒、1.06 mg/粒。

讨论

选择色谱柱：该项试验性研究考察了3根色谱柱：Luna C18(4.6×250 mm，5 μm)柱；Venusil C18(4.6×250 mm，5 μ m)柱；Agilent Extend C18(4.6×250 mm，5 μm)柱。在上述色谱条件下，所得色谱峰皆为正态峰，柱效分别为13 384、4 473、3 535，3根色谱中测得含量结果分别为1.034 mg/g、1.030 mg/g、1.039 mg/g，RSD 0.44%，利用以上3根色谱柱都能够将芍药苷分离，并且3根色谱柱测定出的含量差异无统计学意义，说明该色谱系统下测定芍药苷并无色谱柱选择性。

理论塔板数选择：中国药典白芍项下规定理论塔板数规定为2 000[2]，考虑到本品为中成药，成分较药材复杂，根据选用3根色谱柱测试结果，理论板数为3 535时，芍药苷能与相邻峰完全分离，故参照药典和实验实际情况，规定理论塔板数以芍药苷峰计算，应不得低于3 500。

本研究分别用原标准和修改后的标准考察了3批肝达康胶囊，结果原标准测定为0.82 mg/粒、0.88 mg/粒、0.83 mg/粒，新方法测定结果高于原方法，且较原方法简便易行，准确度高，重现性好，可用肝达康胶囊的质量控制。

[1]国家药典委员会.国家食品药品监督管理局国家药品标准[S].第61册,2008:61-68.

[2]国家药典委员会.中国药典[S].北京:中国医药科技出版社,2010.

Determination of paeoniflorin in liver Dakang capsules by HPLC

Dang Guiling1,Dong Hui1,Du Hongliang1,Zhang Wenshi1,Zhang Jingping1,Zhang Xiaoxue2
Medical Equipment Inspection Institute of Jilin Province(Changchun City)1300621
The Central Hospital of Changchun City 1300512

Objective:To establish a high performance liquid chromatography method for detection of paeoniflorin content in liver Kang capsule.Methods:Agilent HC-C18 column and acetonitrile water(15:85)as mobile phase,the detection wavelength was 230 nm and the column temperature was about 30℃;the flow rate was 0.8 mL/min.Results:There was a good linear relationship between the peak area integral value and the amount of sample in the range of 0.072 7 to 0.654 μg.The average recovery rate was about 99.4%.Conclusion:This method is easy to operate,accurate,with good reproducible,and it can be used for the quality control of liver Kang capsule.

High performance liquid chromatography;Liver Kang capsule;Herbaceous peony

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.6.3