人卵泡壁层颗粒细胞源性非整合诱导多能干细胞的制备

蔡炳，脱颖，李宇彬，麦庆云，刘新颜，徐艳文，周灿权*

(1. 中山大学附属第一医院生殖医学中心，广州 510080；2. 广东省生殖医学重点实验室，广州 510080；3.中山大学附属第一医院病理科，广州 510080)

人卵泡壁层颗粒细胞源性非整合诱导多能干细胞的制备

蔡炳1，2，脱颖3，李宇彬1，2，麦庆云1，2，刘新颜1，2，徐艳文1，2，周灿权1，2*

(1. 中山大学附属第一医院生殖医学中心，广州 510080；2. 广东省生殖医学重点实验室，广州 510080；3.中山大学附属第一医院病理科，广州 510080)

目的 探索将卵泡液中壁层颗粒细胞诱导为非整合的诱导多能干细胞(iPS细胞)，并检测其颗粒细胞方向的分化能力。 方法 在取卵的操作过程中，收集废弃的壁层颗粒细胞，在颗粒细胞培养至第4天时，加入iPS仙台病毒，经过20余天的维持，挑取iPS细胞克隆，并扩增培养。对其多能基因表达情况、外源基因整合情况、自然分化能力、颗粒细胞定向分化能力进行鉴定，并与皮肤细胞来源的iPSC系进行平行分化能力比较。 结果 成功建立了壁层颗粒细胞来源的iPS细胞系，其通过了类似胚胎干细胞的多能性检测及体外三胚层的分化能力检测，尤其在定向分化为颗粒细胞时，分化出了大量FOXL2、CYP19A1和FSHR阳性的细胞，经ELISA试剂盒检测，发现该分化细胞可以分泌AMH并且能够将雄激素转化成雌激素；且颗粒细胞源iPS系较皮肤细胞源的iPS系在颗粒细胞方向的分化效率更高。 结论 提供了一种从人颗粒细胞建立iPSC的方法，并验证了其颗粒细胞方向分化的优势。该系统不仅可以用于建立生殖不孕疾病的iPSC库，还为颗粒细胞功能障碍不孕的患者提供了一种细胞治疗的新思路。……