防己黄芪汤颗粒质量标准初步研究

周 文，潘 琪，张 敏，陈燕芬，刘 博

(1.广州中医药大学第二附属医院·广东省中医药科学院，广东广州 510006；2.广州研创生物技术发展有限公司，广东广州 510663)

·实验研究·

防己黄芪汤颗粒质量标准初步研究

周 文1，潘 琪1，张 敏2，陈燕芬1，刘 博1

(1.广州中医药大学第二附属医院·广东省中医药科学院，广东广州 510006；2.广州研创生物技术发展有限公司，广东广州 510663)

目的建立防己黄芪汤颗粒的薄层色谱（TLC）鉴别法。方法 采用TLC法，对防己黄芪汤颗粒中的代表性药物熟地黄、黄芪、防己进行定性鉴别。结果各供试品溶液色谱中，在与各自对照品药材或对照品溶液色谱相同位置上，显相同颜色的斑点，鉴别斑点清晰，特征斑点专属性强，阴性对照无干扰。结论 该方法专属性强，重复性好，灵敏度高，可作为该制剂的质量控制标准。

防己黄芪汤颗粒；薄层色谱；定性鉴别；质量标准

防己黄芪汤是根据医院名老中医多年的临床验方研制而成的中药制剂，以熟地黄、黄芪、防己、鹿角胶为主药，具有温补肾阳、益气活血的功效，多用于治疗肾阳亏虚、腰膝冷痛、虚寒喘咳等[1－3]。熟地黄味甘，性微温，具有滋阴补血、益精填髓之功效[4]，为方中君药；防己具有利水消肿、祛风止痛的功效，用于治疗水肿脚气、湿疹肠痈、风湿痹痛等症[5]，为方中臣药；黄芪具有扶正祛邪、益气固表、补虚益损等多种功效[6]。为了提高患者的用药依从性，依据临床需要和剂型选择，医院将原汤剂改进为颗粒剂。本研究中采用薄层色谱(TLC)法鉴定该制剂中的防己、黄芪、熟地黄3味中药材，作为检测该制剂质量的指标，以期为改进该制剂的质量标准提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

卡玛薄层点样展开及成像系统（瑞士CAMAG公司）；DK－S26型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；BS224S型分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；LK／CSJ－20型超声波清洗机（成都老肯科技有限公司）；预制硅胶G板（100 mm×100 mm，青岛海洋化工厂）。

1.2 试药

防己黄芪汤颗粒（广州中医药大学附属医院自制，批号分别为2014082111，2014091125，2014091521）；熟地黄对照药材（批号为121198－201105），黄芪对照品（批号为121462－201003），粉防己碱（批号为110711－200708），均购自中国食品药品检定研究院；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 熟地黄[7－9]

2.1.1 溶液制备

供试品溶液：取本品粉末8 g，加80%甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水5 mL使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次10 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，即得。

对照药材溶液：取熟地黄对照药材0.5 g，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。

阴性对照溶液：按处方称取缺熟地黄的各药材，模拟处方生产缺熟地黄的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.1.2 薄层色谱试验

照TLC法(附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液5 μL、对照品溶液3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇(12∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%硫酸香草醛，在105℃加热至斑点显色清晰。置日光灯下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰。详见图1。

图1 熟地黄薄层色谱图

2.2 黄芪[10－12]

2.2.1 溶液制备

供试品溶液：取本品粉末8 g，加乙醇30 mL，加热回流20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3%氢氧化钠溶液15 mL使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH至5～6，用乙酸乙酯3 mL振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干。残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，即得。

对照药材溶液：取黄芪对照药材1 g，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。

阴性对照溶液：按处方组成称取缺黄芪的各药材，模拟处方生产缺黄芪的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.2.2 薄层色谱试验

照TLC法(附录ⅥB)试验，吸取上述2种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇(10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上，显相同颜色的荧光主斑点，且阴性对照无干扰。详见图2。

2.3 防己[13－14]

2.3.1 溶液制备

供试品溶液：取本品16 g，研细，加水40 mL，稀盐酸调至酸性，搅拌使溶解，滤过，滤液用浓氨溶液调至显碱性，用乙醚振摇提取3次，每次20 mL，合并提取液，水浴挥干溶剂，残渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

对照品溶液：取粉防己碱2 mg，加三氯甲烷配制成每1 mL含1 mg的混合溶液，即得。

图2 黄芪薄层色谱图

阴性对照溶液：按处方组成称取缺黄芪的各药材，模拟处方生产缺防己的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.3.2 薄层色谱试验

照TLC法(附录ⅥB)试验，吸取上述2种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－丙酮甲醇－5%浓氨试液(6∶1∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰。详见图3。

2.4 试验条件选择试验

2.4.1 薄层板选择

在选定的条件下，分别运用手工铺制的硅胶G板与预制硅胶G板。结果表明，两者的斑点均清晰，条带无扩散，均能满足鉴别的要求。详见图4。

图3 防己薄层色谱图

2.4.2 影响因素考察

用不同浓度的硫酸水溶液控制相对湿度，观察展开剂在相对湿度为32%和88%时的展开情况。结果显示，湿度影响较小，能满足鉴别的要求，详见图5。在相对湿度为65%时，分别在室温（20，4℃）下考察温度对展开条件的影响。结果显示，温度影响较小，能满足鉴别的要求，详见图6。

图4 G板影响因素考察薄层色谱图

图5 相对湿度影响因素考察薄层色谱图

图6 温度影响因素考察薄层色谱图

3 讨论

黄芪药材按照2015年版《中国药典(一部)》检测方法，以三氯甲烷－甲醇－水（13∶7∶2）为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液为显色剂，但色谱斑点较少，同时斑点分离效果并不理想。因此，改用三氯甲烷－甲醇(10∶1)为展开剂，可得到多个斑点[14]。

熟地黄药材以甲醇作为提取溶剂，采用超声处理的方法，可达到无毒、省时、效果好的目的。同时，在鉴别熟地黄药材时，经反复试验，优化较为理想的TLC分离系统，以氯仿－甲醇（10∶1）为展开剂，斑点明显，无拖尾现象，重复性好，分辨率较高。

熟地黄药材按照2015年版《中国药典(一部)》检测方法，用乙醇作提取溶剂，采取超声处理的方法，达到了无毒、省时、效果好的目的。

TLC法是中药鉴别、中药成方制剂质量标准主要的研究和控制手段，对中药成方制剂的质量标准具有重要意义[15]。TLC法是药物鉴别最基本、简便，使用最广泛的方法[16]，分别在化学药品、抗生素、中药材、中成药及基层药品的鉴别检查中起重要作用[17]，其专属性好，分析速度快，设备简单，操作方便。

综上所述，采用TLC定性鉴别防己黄芪汤颗粒中的防己、黄芪和熟地黄药材，所得斑点清晰，分离度良好，专属性强，阴性样品无干扰，重复性好，方法简便易行，可作为该制剂质量控制的方法。

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Quality Standard of Fangji Huangqi Decoction Granules

Zhou Wen1,Pan Qi1,Zhang Min2,Chen Yanfen1,Liu Bo1
(1.The Second Affiliated Hospital to Guangzhou University of Chinese Medicine·Guangdong Provincial Academy of Chinese Medical Sciences,Guangzhou, Guangdong,China 510006; 2.Guangzhou Research＆ Creativity Biotechnology Co.,Ltd,Guangzhou,Guangdong,China 510663)

Objective To establish the quality standard of Fangji Huangqi Decoction Granules.M ethods Radix Rehmanniae Praeparata, Radix Astragali and Cocculus Orbiculatus in the Granules were identified by thin－layer chromatogram(TLC).Results The characteristic spots on the chromatogram of the preparation were corresponding to the ones of contrast product,and the negative contrast solution had no interference.Conclusion This method has good specialization,reproducibility and sensitivity,which can be used for the quality control of Fangji Huangqi Decoction Granules.

Fangji Huangqi Decoction Granules;TLC;qualitative identification;quality standard

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)05－0010－05

2016－10－18；

2016－11－01)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.05.003

国家自然科学基金[81202398]；广东省中医药科学院中医药转化医学研究专项[YN2014ZHR209，YN2015MS03]；广东省科技计划项目[2013B010102006，2014A020221035，2015A020211025]；国家中医药管理局国家中医临床研究基地业务建设科研专项[JDZX2012010]。

周文(1982－)，男，硕士研究生，研究方向为中药化学和药物制剂，（电子信箱）xtunzhou＠163.com。

刘博(1979－)，男，研究员，博士研究生导师，研究方向为药物化学与中药化学，（电子信箱）doctliu＠263.net。