芦荟多糖对阿司匹林致小鼠胃溃疡的预防作用

刘文杰，王耀辉，陈桂星，曾婷婷，陈雪曼，杨思思，臧 颖 （中山大学中山医学院生理教研室，广东广州510080）

·基础与转化医学·

芦荟多糖对阿司匹林致小鼠胃溃疡的预防作用

刘文杰，王耀辉，陈桂星，曾婷婷，陈雪曼，杨思思，臧 颖 （中山大学中山医学院生理教研室，广东广州510080）

目的：研究芦荟多糖对阿司匹林致小鼠胃溃疡的预防作用．方法：采用阿司匹林灌胃造成小鼠慢性胃溃疡损伤模型，将小鼠随机分为6组：正常对照组、模型组、芦荟多糖低、中、高剂量预处理组、硫糖铝预处理组．分别测定各组小鼠的胃粘膜溃疡指数，计算溃疡发生率及溃疡抑制率，并观察大体及显微镜下组织学变化，以评价阿司匹林致胃溃疡损伤程度及芦荟多糖的预防保护效果．结果：不同浓度的芦荟多糖预处理组与模型组比较，胃粘膜溃疡指数明显下降，差异具有统计学意义（P＜0．05），呈剂量相关性，浓度越高，溃疡指数越低，溃疡抑制率越高．与硫糖铝保护组相比，尽管低、中、高剂量芦荟多糖组小鼠的胃粘膜溃疡指数下降更加明显，但差异无统计学意义（P＞0．05）．结论：芦荟多糖预处理对阿司匹林所致的小鼠胃溃疡有明显的预防保护作用，且其保护作用与硫糖铝相当．

胃溃疡；芦荟多糖；硫糖铝；阿司匹林

0 引言

阿司匹林作为一种传统的解热镇痛药，其降低胃黏膜保护功能致消化性溃疡的不良反应也越来越为人们所熟知．目前，小剂量阿司匹林在预防和治疗各种心血管疾病中的应用逐渐增多，然而有研究发现它的长期使用可对消化系统产生不良后果，严重影响患者的生活质量［1］．芦荟多糖为芦荟主要活性成分，具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、抗炎、降血糖等多种生物作用［2－3］．此外，芦荟多糖还可促进损伤胃粘膜的修复过程［4］，在抗溃疡方面也发挥着重要的作用［5－7］，但其是否对阿司匹林所致的胃溃疡有预防效果尚不清楚．本研究采用阿司匹林诱导小鼠胃溃疡模型，旨在观察芦荟多糖预防性灌胃对胃溃疡小鼠的保护作用，并与硫糖铝（临床上常用的胃黏膜保护剂［8－9］）处理的实验指标进行对比，为临床应用提供实验室依据．

1 材料和方法

1.1 实验动物实验动物采用成年雄性昆明种小鼠，体质量25～30 g，随机分为6组，即正常对照组、阿司匹林致胃溃疡模型组（A组，蒸馏水，0．1 mL／10 g）、阳性药硫糖铝保护组（B组，50 mg／kg，0．1 mL／10 g）、芦荟多糖低、中、高剂量组（C、D、E组，50 mg／kg、100 mg／kg、150 mg／kg，0．1 mL／10 g），每组8只．实验动物由中山大学北校区实验动物中心提供，室温及室内相对湿度分别维持在22℃±1℃和65%±5%，按照小鼠的生物节律将光照时间维持在每日的7：00 AM～7：00 PM．为尽量减轻动物在实验中的痛苦，所有实验步骤均按照实验动物的相关使用原则进行操作．

1.2 药品与试剂芦荟多糖，贝兴牌芦荟软胶囊（主要原料：芦荟汁液冻干粉、大豆油、蜂蜡、明胶、甘油、水、柠檬黄、二氧化钛、胭脂红．标志性成分：芦荟多糖，占1．3%），由广东长兴生物科技股份有限公司提供，批号RLH582212；硫糖铝咀嚼片，由北海阳光药业有限公司提供，批号120507；阿司匹林肠溶片，由湖南新汇制药有限公司提供，批号130305．

1.3 方法

1．3．1 给药方法与取材 首先，模型对照组、芦荟多糖3个剂量组及硫糖铝组按以上剂量灌胃给药1次．1 h后，除正常对照组外，其他各组均灌胃给予300 mg／kg，每10 g灌胃0．1 mL的阿司匹林肠溶片悬浊液造模．给予正常活动和饮食，并重复上述灌胃5 d．第5天灌胃后，禁食24 h后脱颈椎处死，解剖取胃，结扎胃的贲门部与幽门部并经胃壁向胃腔内注入4%甲醛溶液0．1 mL，将胃浸泡在4%甲醛中，30 min后沿胃大弯剖开并用生理盐水冲洗干净，按所在组别进行编号［10］．

1．3．2 胃粘膜损伤指数和抑制率的计算 由两位不清楚实验分组的观察者共同在解剖显微镜下观察溃疡情况，记录病灶长度并打分．其中病灶长度＜1 mm为1分，病灶长度＜2 mm为2分，病灶长度＜3 mm为3分，病灶长度＜4 mm为4分，若病灶长度＞4 mm，则分段计分，病灶宽度＞2 mm时，分数乘以2，最后以全胃病灶分数总和作为该动物胃粘膜损伤指数［11］，同时计算以下指标：①溃疡指数：以全胃病灶分数总和作为溃疡指数，每组溃疡指数以表示，并进行组间t检验．②溃疡抑制率：溃疡抑制率＝（模型对照组溃疡指数⁃给药组溃疡指数）／模型对照组溃疡指数× 100%．③溃疡发生率：溃疡发生率＝形成溃疡动物数／实验动物数×100%．

1．3．3 胃粘膜组织病理学检查 在胃腺近幽门1．0 cm处胃小弯侧取胃组织，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察胃黏膜组织结构及细胞结构的变化，并镜下摄片．

1.4 统计学处理采用SPSS13．0统计学软件对数据进行分析，计量资料用表示，组间两两比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，P＜0．05表示差异具有统计学意义．

2 结果

2.1 各组溃疡指数及溃疡抑制率比较正常对照组无溃疡发生．与模型对照组相比，硫糖铝组（P＜0．05）和低（P＜0．05）、中（P＜0．01）、高浓度（P＜0．01）芦荟多糖预处理组的溃疡指数明显降低；硫糖铝，低、中、高浓度芦荟多糖组均对胃溃疡有较高的抑制率，且芦荟多糖的浓度越高，抑制率越高．与硫糖铝保护组相比，尽管低、中、高浓度芦荟多糖组小鼠的胃粘膜溃疡指数下降更加明显，但差异无统计学意义（P＞0．05，表1）．

2.2 胃粘膜组织外观正常对照组小鼠胃粘膜光滑，无溃疡、糜烂及出血点．模型组胃粘膜充血、水肿，出血明显，可见糜烂面和溃疡形成．各用药组可见胃粘膜结构较为完整，出血点明显减少（图1）．

图1 小鼠的胃粘膜外观

2.3 组织病理学改变镜下可见正常对照组小鼠胃的粘膜层、固有层、肌层结构完整连续，腺体排列紧密，未见粘膜充血、出血；模型对照组粘膜结构紊乱，失去完整性及连续性，部分区域粘膜上皮层缺失，腺体排列疏松，腺体细胞水肿，可见粘膜下层出血及炎性细胞浸润；硫糖铝和芦荟多糖组胃粘膜损伤明显减轻，上皮基本完整，腺体排列较整齐，未见炎性细胞浸润，胃粘膜充血较轻微（图2）．

图2 各组小鼠胃粘膜组织病理学改变

3 讨论

本研究阿司匹林致小鼠胃溃疡的发生率为100%，溃疡指数为实验研究的观测指标，阿司匹林通过抑制环氧酶（cyclcoxygenase，COX），从而抑制前列腺素的合成，发挥解热镇痛、抗炎抗风湿的作用，但同时由于抑制了胃黏膜的COX⁃1，减少前列腺素的合成，使得碳酸氢盐和黏液的分泌减少，减弱胃黏膜保护屏障，导致消化性溃疡的发生［2，12］．此外，阿司匹林对胃酸分泌的影响也可能是导致胃溃疡发生的原因之一［13－14］．阿司匹林导致的溃疡在临床上比较常见，可以引起大出血、穿孔，甚至死亡，这在很大层面上限制了阿司匹林在临床上的应用［15］．芦荟作为一种古老的常用中药，从传统医学到现代医学都对芦荟的药用价值和保健功能给予充分的肯定［16－17］．有研究［3，18－19］表明，芦荟多糖在抗溃疡方面也发挥着重要的作用，芦荟多糖可通过增加内皮生长因子（endothelial growth factor，EGF）的表达来增强胃粘膜清除自由基的能力，促进损伤胃粘膜的修复过程［4］．此外，由于芦荟多糖具有黏性，可附着于溃疡表面形成一层保护膜，防止和减少胃酸对黏膜的刺激［6］．本研究观察到经芦荟多糖处理过的小鼠点状溃疡、线状溃疡明显降低，总溃疡指数降低，溃疡抑制率达到84．93%，表明芦荟多糖能抑制阿司匹林导致的小鼠胃溃疡，促进胃黏膜损伤的愈合，明显改善胃黏膜病变．由此可见，芦荟多糖对阿司匹林导致的溃疡有明显的预防作用．

本研究在前人研究成果的基础上，应用阿司匹林型小鼠胃溃疡模型来探索芦荟多糖的抗溃疡作用．结果显示，芦荟多糖组溃疡指数明显下降，其中中、高剂量的芦荟多糖组溃疡指数降低程度更甚（P＜0．01）．这表明芦荟多糖对阿司匹林所致的胃溃疡模型具有良好的预防作用；相同剂量给药的芦荟多糖对该模型的预防作用略优于硫糖铝，且鉴于芦荟的制备和使用方法简单方便、价格便宜、副作用少等优点，该结果预示着芦荟多糖可能有更好的临床实用价值．

已有研究［7］表明，芦荟多糖对实验性结肠炎肠粘膜具有良好的保护作用．以往研究多采用胃粘膜急性损伤来建造胃溃疡模型，这不符合临床长期使用阿司匹林引起胃溃疡的情况，因此，本研究建立并优化阿司匹林致小鼠胃溃疡的慢性模型，对于预防阿司匹林致小鼠胃溃疡的研究起重要作用，更贴近临床．除此以外，本研究设置了空白阴性对照组以及硫糖铝阳性对照组，在充分排除随机误差的前提下以解剖镜下胃黏膜的溃疡个数和溃疡指数为指标，以病理组织切片的结果为依据探究芦荟多糖对胃溃疡的预防作用以及不同浓度下的差异，以期得出更为客观的结论．

综上所述，芦荟多糖具有抗阿司匹林所致胃溃疡的作用，这为芦荟多糖与阿司匹林的联合用药提供了理论依据．但其二者之间的最佳浓度配伍仍有待进一步探究．芦荟多糖对阿司匹林所致的胃溃疡的保护作用可能是多种作用的综合效果，不仅对胃黏膜表面起保护作用，也可直接对胃酸分泌、胃蛋白酶分泌等致溃疡因素有抑制作用，提高胃液pH值，促进溃疡愈合［20］，但其组织细胞及分子水平的作用机制还有待进一步研究．

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The preventive effect of aloe polysaccharides on gastric ulcer in mice induced by aspirin

LIU Wen⁃Jie，WANG Yao⁃Hui，CHEN Gui⁃Xing，ZENG Ting⁃Ting，CHEN Xue⁃Man，YANG Si⁃Si，ZANG Ying
Department of Pathophysiology，Zhongshan School of Medical，Sun Yat⁃sen University，Guangzhou 510080，China

AIM：To investigate the preventive effect of aloe polysaccharides on gastric ulcer in mice induced by aspirin．METHODS：The model of chronic gastric ulcer caused by gavage of aspirin was established．The mice were randomly divided into 6 groups，including normal control group，model group，aloe poly⁃saccharides preconditioning groups（including low⁃dose，middle⁃dose and high⁃dose group）and sucralfate preconditioning group．The ulcer index of mice were measured in per groups，and the ulcer incidence and inhibition rate of gastric ulcers were calculated．Through gross appearance and histological changes under the microscope，the injury severity of gastric ulcer induced by aspirin and preventive effect of aloe polysaccharides on gastric ulcers were evaluated．RESULTS：Ulcer indexes of aloe polysaccharides preconditioning groups were obviously lower than those of model control，with statistically significant differences（P＜0．05）．The more the aloe polysaccharides dosage，the lower ulcer indexes and the higher rate of inhibition of gastric ulcer were，which was dose related．Compared with sucralfate preconditioning group，Ulcer indexes were reduced significantly in aloe polysaccharides precon⁃ditioning groups，with no statistically significant differences（P＞0．05）．CONCLUSION：The preconditioning of aloe polysaccha⁃rides has significant preventive effect on gastric ulcer in mice induced by aspirin，and its effect is comparable with sucralfate．

gastric ulcer；aloe polysaccharides；sucralfate；aspirin

R573．1

A

2095⁃6894（2017）03⁃30⁃03

2016－12－15；接受日期：2017－01－06

国家自然科学基金面上项目（81371228）；广东省科技计划项目（2012B031800254）；广东省自然科学基金面上项目（S2013010016647）；中央高校基本科研业务费专项资金资助（16ykjc02）

刘文杰．博士．E⁃mail：sysuliuwenjie＠163．com

臧 颖．博士，副教授，硕士生导师．E⁃mail：yingzang＠163．com