闽产藤茶总黄酮提取物中三种主成分的含量测定

易开，林珠灿，柳庆龙，徐伟，郭素华，2

（1.福建中医药大学药学院，福建福州350122；2.福建卫生职业技术学院，福建福州350101）

闽产藤茶总黄酮提取物中三种主成分的含量测定

易开1，林珠灿1，柳庆龙1，徐伟1，郭素华1，2

（1.福建中医药大学药学院，福建福州350122；2.福建卫生职业技术学院，福建福州350101）

目的建立同时测定藤茶总黄酮提取物中二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素的HPLC含量分析法。方法采用TOP ODS-AQ column（4.6×250 mm，5 μm）色谱柱，以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，检测波长252 nm，柱温30℃。结果二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素的线性范围分别在31.63～632.69（r＝0.9999）、1.61～32.13（r＝0.9998）、4.62～92.41（r＝0.9998）μg·mL-1；平均加样回收率分别为97.58%、103.04%、102.69%，RSD分别为1.42%、0.85%、1.35%。结论该法操作简便、快速、结果准确，可适用于藤茶总黄酮提取物的质量控制。

藤茶总黄酮提取物；二氢杨梅素；杨梅苷；杨梅素；高效液相色谱法

藤茶系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata（Hand-Mazz）W.T.Wang的茎叶，又名甜茶藤、龙须茶等，主要分布于福建、江西、广东、云南、贵州等地，是一种应用历史悠久、药食两用的类茶植物资源，福建泰宁、将乐、尤溪等县客家人民将其视为瑰宝。藤茶味甘、淡，性凉，具有清热解毒、利湿消肿之功效，主治感冒风热、咽喉肿痛、目赤肿痛、黄疸型肝炎、痈肿疮疖等症［1］。近年来有研究表明：藤茶为富含黄酮类成分的一种天然植物，其总黄酮含量高达43.4%～44.0%，其中二氢杨梅素（又称福建茶素）含量可高达30%左右，为其最主要的特征性成分［2］。现代药理研究显示：藤茶总黄酮提取物具有良好抗肿瘤［3-4］、保肝护肝、降血糖降脂、抗氧化、抗炎抑菌、调节免疫力等作用［5］，可见藤茶总黄酮提取物极具开发价值和应用前景。然而目前对藤茶总黄酮提取物的研究主要集中在提取、纯化工艺及药理活性等方面，却尚未见对藤茶总黄酮提取物的多成分分析的研究报道。基于此，本研究采用HPLC法同时测定了闽产藤茶总黄酮提取物中二氢杨梅素、杨梅苷及杨梅素的含量。

1仪器与试剂

LC－20AT液相色谱仪、SPD-20A紫外检测器（日本岛津公司）；XS105型电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。藤茶总黄酮提取物样品是在前期采用星点设计——响应面法优化大孔树脂纯化闽产藤茶总黄酮提取物工艺的基础上制备的［6］；对照品：二氢杨梅素（成都曼思特生物科技有限公司，批号：MUST-14110908，纯度≥98.0%）；杨梅苷（北京

盈泽纳新化工技术研究院，批号：15081713，纯度为99.41%），杨梅素（北京盈泽纳新化工技术研究院，批号：15050810，纯度为98.31%）；甲醇为色谱纯（国药集团化学试剂有限公司）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件参考文献［7］，色谱柱TOP ODS-AQ柱（4.6×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-1%磷酸溶液（D），梯度洗脱（0～10 min，35%A；10～20 min，35%A→80%A；20～30 min，80%A）；检测波长：252 nm；柱温：30℃；进样量10 μL。在上述色谱条件下，二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素3个色谱峰分离度均大于1.5，理论板数均大于3 000，样品中其他成分对其测定均无干扰。色谱图见图1、图2。

图1混合对照品HPLC色谱图

2.2供试品溶液的制备精密称取闽产藤茶总黄酮提取物样品5.0 mg，置于10 mL容量瓶中，加纯甲醇定容，作为供试品溶液，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液备用。

2.3对照品溶液的制备分别精密称定二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素对照品适量，加甲醇配制成每1 mL分别含二氢杨梅素632.69 μg、杨梅苷32.13 μg、杨梅素92.41 μg的混合对照品储备溶液，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液备用。

图2藤茶总黄酮提取物样品HPLC色谱图

2.4线性关系考察精密吸取2.3项下混合对照品储备液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0 mL分别置于10 mL容量瓶中，用纯甲醇定容至刻度，振荡摇匀，依照上述色谱条件分别进样分析。以峰面积（Y）对各对照品浓度（X）进行线性回归，见表1。

2.5精密度试验精密吸取混合对照品溶液，依照2.1项色谱条件，连续进样5次，记录峰面积，分别计算二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素3种成分峰面积的RSD（n＝5）为0.16%、0.13%、0.55%，结果显示仪器精密度良好。

表1藤茶总黄酮提取物中3种成分线性关系

2.6重复性试验精密称取同一批藤茶总黄酮提取物样品5份，按2.2项下方法制备得到供试品溶液，分别依照上述色谱条件进样测定。结果显示：样品中二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素的平均含量分别为（858.05±13.48）、（4.84±0.14）、（15.57±0.3）μg· mg-1，RSD分别为1.57%、2.94%、1.94%，表明该方法重复性良好。

2.7稳定性试验按2.2项下制备得到供试品溶液，分别于0、2、4、12、24、48 h进样分析，记录峰面积。结果显示：二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素峰面积的RSD分别为0.27%、1.64%、0.69%，可见样品溶液在48 h内稳定性良好。

2.8加样回收率试验精密称取6份含量已知的同一批藤茶总黄酮提取物样品2.5 mg，分别精密加入适量的对照品溶液，依照2.2项下方法制备得到供试品溶液，分析测定含量，见表2。

表2藤茶总黄酮提取物加样回收率（n＝6）

2.9样品含量测定分别精密称取不同批次的闽产藤茶总黄酮提取物样品，依照2.2项下方法制备得到供试品溶液，在上述色谱条件下进行测定，结果见表3。

3讨论

3.1波长选择二氢杨梅素在218、291 nm波长处有较大吸收，而杨梅苷在252、373 nm波长处有较大吸收，杨梅素的最大吸收波长为251、351 nm，综合考虑后，本次实验选择252 nm为检测波长，在此条件下各峰的基线平稳，分离度良好，检测灵敏度高。

表3藤茶总黄酮提取物3种成分含量测定结果μg·mg-1

3.2含量分析本实验建立了HPLC法同时测定闽产藤茶总黄酮提取物中二氢杨梅素、杨梅苷和杨梅素含量的分析方法，可用于藤茶总黄酮提取物中多成分的定量分析。通过HPLC法含量分析，结果表明：总黄酮中二氢杨梅素含量最高，可高达到80%以上；杨梅苷含量为0.47%～1.22%；杨梅素为1.56%～2.61%。本实验测定3种成分，比以往方法更为简便、快速、准确，为藤茶总黄酮提取物的全面质量控制提供科学依据。

［1］国家中医药管理局编委会.中华本草［M］.上海：上海科学技术出版社，2008：4229.

［2］何桂霞，裴刚，周天达，等.显齿蛇葡萄中总黄酮和二氢杨梅素的含量测定［J］.中国中药杂志，2000，25（7）：423-425.

［3］周春权，林静瑜，姚欣，等.藤茶总黄酮体外抗肿瘤实验研究［J］.中国医药科学，2012，2（9）：50-51.

［4］郑作文，郭成贤，毛健，等.藤茶总黄酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用的实验研究［J］.时珍国医国药，2009，20（5）：1158-1159.

［5］张琼，陈立峰.显齿蛇葡萄总黄酮的生物活性研究进展［J］.中南药学，2006，4（4）：302-304.

［6］柳庆龙，李煌，林珠灿，等.星点设计-响应面法优化大孔树脂纯化藤茶总黄酮的工艺［J］.中国药房，2016，27（7）：942-945.

［7］陈图锋，高文华，唐敏.高效液相色谱法测定藤茶中二氢杨梅素和杨梅素含量［J］.亚太传统医药，2015，11（1）：28-30.

R284.1

A

1000-338X（2016）06-0051-02

2016-12-15

福建省中青年教师教育科研项目（JA15254）；福建省科技厅引导性项目（2017Y0050）

易开（1991—），男，硕士研究生，研究方向：天然药物成分与活性研究。

郭素华（1964—），女，教授，博士。

E-mail：guosuhua2005@126.com