基于GC-MS的灰葡萄孢菌代谢组分析

胡志宏，常旭念，代 探，吴嘉纯，刘鹏飞

(中国农业大学 植物保护学院，北京 100193)

基于GC-MS的灰葡萄孢菌代谢组分析

胡志宏，常旭念，代 探，吴嘉纯，刘鹏飞*

(中国农业大学 植物保护学院，北京 100193)

对农作物重要病害灰霉病的致病菌——灰葡萄孢菌进行了代谢组提取溶剂、衍生化时间和温度等前处理条件以及内标物筛选优化。结果表明，以水杨苷作为内标物，试验条件下以甲醇-水(80∶20)为提取溶剂，按照4.0 mL/0.1 g菌丝的剂量进行提取，采用N,O-双(三甲基硅烷基)乙酰胺和甲氧基胺盐酸盐在37 ℃和6 h条件下进行衍生化，可实现多种代谢物衍生产物收率和稳定性的最优化。灰葡萄孢菌丝代谢组的检测获得了210个峰，其中50种代谢物与NIST 2008的匹配度达到80%以上，主要为氨基酸类、醇类、有机酸类、糖类等代谢物，并通过标准品对部分代谢物进行了定性。典型的17种代谢物在1.0～100 μg/mL范围内线性关系良好，相关系数均大于0.98，检出限为0.02～10.0 ng/mL，定量下限为0.1～34.0 ng/mL。方法精密度分析结果显示89.05%代谢物的相对标准偏差为0.01%～16.8%。所建立的方法适合于丝状真菌的代谢组检测，可为农业和医学领域开展微生物代谢组研究提供参考。

灰葡萄孢菌；代谢组；样品前处理；硅烷化

农田十大病害之一灰霉病致病菌灰葡萄孢菌(Botrytiscinerea)寄主范围广且变异能力强，给农业生产造成了严重的危害[1]，对其常用的杀菌剂极易产生抗药性，需不断开发新型杀菌剂以有效控制该病害的田间危害。近年来，代谢组学的发展为揭示有机体的生命信息带来了新的机遇[2-4]。……