川芎嗪对类风湿性关节炎肺功能损伤IL-17与Foxp3的影响①

罗文哲，金玄俊，梁立春，刘 洋，王建杰，王 石，张雪松，刘程伟，王新安，倪强强

(1.佳木斯大学基础医学院，黑龙江 佳木斯 154007；2.赤峰市计划生育服务中心，内蒙古自治区 024000)

川芎嗪对类风湿性关节炎肺功能损伤IL-17与Foxp3的影响①

罗文哲1，金玄俊1，梁立春1，刘 洋1，王建杰1，王 石1，张雪松1，刘程伟1，王新安1，倪强强2

(1.佳木斯大学基础医学院，黑龙江 佳木斯 154007；2.赤峰市计划生育服务中心，内蒙古自治区 024000)

目的：探讨川芎嗪对大鼠类风湿性关节炎(RA)肺功能损伤IL-17与Foxp3表达。方法：40只大鼠随机分为正常组、模型组、川芎嗪低剂量组、川芎嗪高剂量组和雷公藤阳性药物对照组。应用免疫组化方法观察大鼠肺组织IL-17与Foxp3的表达。结果：和正常组相比，模型组IL-17表达增强，Foxp3表达降低(P<0.05)；经过川芎嗪和雷公藤药物处理后，IL-17表达降低而Foxp3表达有所回升(P<0.05)。结论：川芎嗪能改善RA大鼠肺部炎症，机制与调控IL-17与Foxp3表达有关。

川芎嗪；类风湿性关节炎；肺损伤

类风湿性关节炎(RheumatoidArthritic，RA) 是目前一种发病原因不明确的缓慢性、以炎症改变的滑膜炎为主要的系统性自身免疫疾病。其主要特征为手、足较小关节的多关节、侵袭性、对称性关节炎症改变，通常伴随关节以外的器官受累及[1]。肺脏具有丰富的血管和结缔组织，因而常见肺功能改变，表现为通气功能障碍，小气道阻塞等，与临床症状、体征及实验室检查具有很高的相关性[2]。川芎嗪是免疫调节剂，近年来发现川芎嗪对类风湿性关节炎及肺功能损伤具有很好的治疗作用[3～6]。但其作用机制尚不详尽，没有关于IL-17和Foxp3影响的研究。本研究进一步探讨川芎嗪对类风湿性关节炎大鼠肺损伤的机制。

1 材料

1.1 动物准备

雌性清洁级(SD)大鼠40只，体重为(200±20)g，由大连医科大学购买，按常规饲养，自由饮食、饮水。

1.2 药品与试验用试剂

川芎嗪由山东省潍坊市制药厂有限公司生产。雷公藤多苷(TGT)是由湖北省黄石飞云制药有限责任公司生产。弗氏完全佐剂(FCA)是由美国Sigma公司购买。免疫组化试剂盒购自于北京市中山金桥生物技术有限公司。

2 方法

2.1 类风湿性关节炎(RA)动物模型制作及其分组

清洁级(SD)大鼠40只，于动物右后肢足跖部的皮内注射Freund's完全佐剂，剂量为0.1mL，致炎，制成佐剂性关节炎模型，致炎48d。分为5组，分别为模型对照组、川芎嗪大剂量治疗组、低剂量治疗组、(雷公藤多苷)阳性对照组。另取8只大鼠作为正常对照组。药物处理于致炎41d开始给药，注射生理盐水0.8mL于模型对照组大鼠，盐酸川芎嗪注射液143.0mg/kg注射于川芎嗪高剂量组大鼠、川芎嗪小剂量组大鼠注射71.5mg/kg川芎嗪注射液、雷公藤60.0mg/kg注射于阳性对照组大鼠。每日1次，于腹腔注射，持续给药7d，正常进食、进水。于最后一次给药24h后，对气管和双肺进行完整分离，取出右肺中叶固定，石蜡包埋，切片，留待检测。

2.2 免疫组化方法检查肺组织IL-17与Foxp3的表达

取肺组织，应用免疫组化SP法，按试剂盒的说明书进行操作，图像下采集，随机选择5个视野，应用莱卡Qwin软件进行计算免疫组化染色的OD值。

2.3 统计学方法

3 结果

3.1 川芎嗪对大鼠肺组织中IL-17与Foxp3表达的影响

肺组织IL-17与Foxp3蛋白表达(见图1、2及表1)。在图中可见，模型对照组图中的炎症细胞表达明显增高，经过雷公藤和川芎嗪治疗后的组织中炎性细胞明显减少。和正常组相比较，模型组IL-17表达增强，Foxp3表达降低，经统计学处理差异具有统计学意义(P<0.05)；经过川芎嗪和雷公藤药物处理后，IL-17表达降低而Foxp3表达有所回升，经统计学处理差异具有统计学意义(P<0.05)。

图1 肺组织IL-17蛋白表达(10×40)(A.正常组；B.模型组；C.TGT组；D.川芎嗪高剂量组)

图2 肺组织Foxp3蛋白表达(10×40)(A.正常组；B.模型组；C.TGT组；D.川芎嗪高剂量组)

表1 RA大鼠肺组织IL-17、Foxp3蛋白表达水平

注： 和模型对照组比较*P<0.05。

4 讨论

类风湿性关节炎除关节受损外，通常累及内脏器官，常见的是肺与胸膜的受损。资料显示由RA导致的肺功能损伤其发病率已达到了50%～80%。课题组之前以川芎嗪治疗大鼠类风湿性关节炎肺损伤，证明了川芎嗪的治疗效果[6]。本实验进一步地探讨川芎嗪对RA大鼠肺组织IL-17和Foxp3蛋白的影响。IL-17为CD4+T细胞的新亚型，表达多种炎性细胞因子， 如IL-6、IL-17a和TNF-α等。IL-17是T细胞产生的一种前炎症细胞因子，是诱导早期炎症反应的启动因素， 与自身免疫的调节密切相关。IL-17能够诱导和调节机体的多种免疫应

答反应，在系统性红斑狼疮、风湿性关节炎、银屑病等自身免疫性疾病表达增加[7]。本研究结果显示，模型组IL-17表达增强，经过川芎嗪和雷公藤药物处理后，IL-17表达降低。证明川芎嗪能抑制T细胞分泌IL-17，进而抑制炎症性因子IL-6等的产生，发挥缓解RA肺损伤作用。Foxp3是CD4+CD25+Treg细胞上特异性表达的一种核转录因子。CD4+CD25+Treg细胞是与IL-17相反功能的CD4+T细胞亚群。在多种自身免疫性疾病中，Treg的数量明显减少，Foxp3表达降低[8]。先前的研究证明，川芎嗪缓解RA所致肺部炎症机制是调控TGF-β1/Smads信号，TGF-β1和Smad3水平表达增加，Smad7表达减弱[6]。本实验证明，经过川芎嗪治疗后，Foxp3表达增强。我们认为合理的解释是川芎嗪激活了TGF-β1，减弱了Smads的活化作用，进而活化下游Foxp3的转录。可见，IL-17和Foxp3相互拮抗调节RA的进展，也同样作为有效药物的评价指标。

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1.黑龙江省教育厅面上项目，编号：12531074；2.黑龙江省佳木斯大学校级面上项目，编号：S2011-004。

罗文哲(1976～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，副教授，硕士，研究生导师。

王建杰(1968～)女，黑龙江东宁人，博士，教授，博士研究生导师。E-mail：jmsdxjianjie@163.com。

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