E2F-1在肝细胞癌中的表达情况及其对患者预后的影响研究

李 珍 许 涛 程雄飞

E2F-1在肝细胞癌中的表达情况及其对患者预后的影响研究

李 珍 许 涛 程雄飞*

目的 分析E2F-1在肝细胞癌中的表达，探讨E2F-1对患者预后的影响。方法 收集2006年1月至2011年12月行根治性切除术的79例肝癌患者的病理标本为研究对象。取距离癌灶>5cm的癌旁组织30例作为对照。采用免疫组化法检测E2F-1的表达情况。对比肿瘤组织与癌旁组织E2F-1的表达差异，分析E2F-1的表达与临床病理参数间的相关性及对术后生存时间的影响。结果 79例肿瘤组织中E2F-1阳性表达39例，阳性率为49.4%；30例癌旁组织中未见E2F-1表达。肿瘤组织与癌旁组织中的E2F-1阳性表达率具显著性差异（P<0.05）。E2F-1的表达与AFP水平、TNM分期及肿瘤直径相关，随着AFP水平的下降，TNM分期的降低及肿瘤直径的减小，E2F-1的表达越高（P<0.05）；而与患者的年龄、HBsAg感染情况、GGT及肿瘤数量等无关（P>0.05）。E2F-1阳性组总体1、3、5 年生存率分别为61.5%、59.0%、46.2%，阴性组总体1、3、5 年生存率分别为37.5%、32.5%、17.5%，组间比较E2F-1阳性组总体1、3、5 年生存率均高于E2F-1阴性组（P<0.05）。结论 E2F-1在肝癌组织中呈高表达，其表达水平与AFP水平、肿瘤直径及临床分期相关；E2F-1低表达是肝癌术后的总体生存率的独立预后因素，可作为肝癌根治切除术后的独立预后因子。

E2F-1 肝细胞癌 表达 预后

肝细胞癌恶性程度较高，尽管疾病的诊治近年来已取得较大进展，但总体效果仍不理想，术后5年生存率仅为24%~50%［1］。细胞周期相关性转录因子E2F-1（transcription factor 1，E2F-1）是细胞周期相关转录因子E2F的家族成员之一，其直接参与了遗传物质的合成和修复，对细胞的增殖与凋亡发挥着重要的调控作用［2］。研究发现E2F-1或许为癌基因或抑癌基因中的一种，与肿瘤的发生与发展具有相关性［3］。本文采用免疫组织化学法检测E2F-1在肝细胞癌中的表达，探讨其在患者术后预测中的应用价值。

1 临床资料

1.1 一般资料 收集2006年1月至2011年12月于本院行根治性切除术的79例肝癌患者的病理标本为研究对象。其中男64例，女15例；年龄26~74岁，平均年龄（48.4±6.1）岁；甲胎蛋白（AFP）≤20μg/ L者21例，>20μg/L58例；谷氨酰转肽酶（GGT）≤50U/L者17例，>50U/L者61例。肿瘤直径≤5cm者29例，>5cm者50例；TNM分期Ⅰ期21例，Ⅱ期31例，Ⅲ期19例，Ⅳ期8例。取距离癌灶>5cm的癌旁组织30例作为对照。

1.2 检测方法 采用免疫组织化学法检测E2F-1的表达情况。一抗为E2F-1兔抗人单克隆抗体（Proteintech公司），二抗山羊抗兔/鼠IgG抗体- HRP（DATO 公司）。病理组织经固定、石蜡包埋，连续切片厚度约5μm。采用免疫组化S-P 法染色。常规脱蜡、抗原修复、封闭后，滴加 E2F-1 兔抗人单克隆抗体（1∶200），4℃过夜，加入山羊抗兔/鼠IgG抗体- HRP（1∶50），置于37℃ 恒温箱30min。DAB显色，苏木素复染后、脱水、封片。

1.3 判定标准 胞核部分出现淡黄色至棕黄色为阳性。光学显微镜下每张切片随机选取5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，根据阳性细胞染色强度和所占百分比进行评分。染色强度：无色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分；阳性细胞所占百分比：阴性计0分，0~10%计1分，11%~50%计2分，51%~75%计3分，>75%计4分。两者乘积为最终阳性细胞积分：0~3分为阴（-），>3分为阳性（+）。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件。表达阳性率、相关性分析及生存率比较均采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 E2F-1在肝癌及癌旁组织中的表达对比 79例肿瘤组织中E2F-1阳性表达39例，阳性率为49.4%，30例癌旁组织中未见E2F-1表达；肿瘤组织与癌旁组织中的E2F-1阳性表达率差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2 E2F-1的表达与临床病理参数间的相关性 E2F-1的表达与AFP水平、TNM分期及肿瘤直径相关，随着AFP水平的下降，TNM分期的降低及肿瘤直径的减小，E2F-1的表达越高（P<0.05）；而与患者的年龄、HBsAg感染情况、GGT及肿瘤数量等无关（P>0.05）。见表1。

表1 E2F-1的表达与临床病理参数间的相关性

2.3 E2F-1阳性组和阴性组复发情况比较 E2F-1阳性组总体1、3、5 年生存率分别为61.5%、59.0%、46.2%，阴性组总体1、3、5 年生存率分别为37.5%、32.5%、17.5%，组间比较E2F-1阳性组总体1、3、5年生存率均高于E2F-1阴性组（P<0.05）。见表2。

表2 E2F-1阳性组和阴性组复发情况比较［n（%）］

3 讨论

E2F家族是一类转录调节因子，在调节细胞周期方面具有重要作用。E2F-1为E2F家族的8个成员中目前研究较多的一类，其基因定位于人20号染色体的长臂，可诱导多种细胞周期转换过程中DNA复制所需的关键性酶和蛋白质的表达，在调控细胞由G1期向S期的过渡中发挥着关键作用［4］。

E2F-1虽与多种肿瘤的发生与发展相关，但研究发现在不同类型的恶性肿瘤中，E2F-1 所扮演的角色并不同，有可能发挥着癌基因和抑癌基因两种相反的作用［5］。在非小细胞肺癌中，E2F-1过度表达可激活胸苷酸合成酶及Survivin 基因的表达，促进肿瘤增殖，增强肿瘤的耐药性，使预后恶化［6］。Vuaroqueaux等［7］在早期乳腺癌中以检测患者E2F-1的RNA表达水平，结果发现E2F-1低表达的乳腺癌患者预后更佳；而对胃癌患者的相关研究发现，E2F-1高表达可显著抑制癌细胞的增殖，阻止细胞进入S期［8］。本研究中，79例肿瘤组织中E2F-1阳性表达39例，阳性率为49.4%；30例癌旁组织中未见E2F-1表达。肿瘤组织与癌旁组织中的E2F-1阳性表达率具显著性差异（P<0.05）。提示E2F-1阳性表达患者的生存期明显高于阴性表达患者，E2F-1在肺癌中可能起到抑癌基因作用，其低表达是肝癌患者术后预后不良的独立因素，此外APF 水平、肿瘤大小也可视为术后生存率的影响因素。但具体机制尚待于深入性研究。

本研究结果显示，E2F-1的表达与AFP水平、TNM分期及肿瘤直径相关，随着AFP水平的下降，TNM分期的降低及肿瘤直径的减小，E2F-1的表达越高（P<0.05）；E2F-1阳性组总体1、3、5年生存率分别为61.5%、59.0%、46.2%，阴性组总体1、3、5 年生存率分别为37.5%、32.5%、17.5%，组间比较E2F-1阳性组总体1、3、5 年生存率均高于E2F-1阴性组（P<0.05）。E2F-1作为重要的细胞周期调控因子参与了细胞由G0/G1期向S期的过渡。在G0/G1早期，E2F-1对于某些基因的转录具有正反馈调节作用，而这些基因的产物如周期素A、E和Cdc25等，都是细胞进入S期必需的酶类及蛋白质。除此之外，E2F-1还参与调控细胞凋亡［9-10］。Sara等［11］研究发现E2F-1基因在人类肝癌模型能够激活PIK3CA/Akt/ mTOR和c-Myb/COX-2信号通路，从而抑制c-Myc驱动的肝癌细胞凋亡，在肝癌中发挥着抗凋亡作用。有文献报道通过免疫组化方法检测肝硬化伴肝炎及肝癌肝硬化标本中的E2F-1表达，结果显示E2F-1在肝癌中呈低表达，提示E2F-1具有抑癌基因作用［13-14］，与本研究结论相一致。E2F-1转录因子的活化和高表达导致细胞周期运行和肿瘤细胞增殖加快，最终导致细胞的恶性转化和无节制增殖。Zhang等［15］发现，E2F-1的过度表达与乳腺癌的分级和预后差密切相关，表明E2F-1在一定程度上可以反映肿瘤的生物学特征。随着乳腺癌分级和分期的升高，E2F-1的表达也随之增加，提示E2F-1高表达的乳腺癌具有恶性度更高、更易发生浸润等特征。

综上所述，E2F-1在肝癌组织中呈高表达，其表达水平与AFP水平、肿瘤直径及临床分期相关；E2F-1低表达是肝癌术后的总体生存率的独立预后因素，可作为肝癌根治切除术后的独立预后因子。

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Objective To investigate the expression of E2F-1 in hepatocellular carcinoma and its effect on prognosis. Methods The pathological specimens from 79 cases of patients with liver cancer underwent radical resection in our hospital from January 2006 to December 2011 were collected. 30 cases of para-carcinoma tissues that were more than 5 cm away from neoplastic foci were compared. The expression of E2F-1 was detected by immunohistochemistry. The expression difference of tumor tissue and para-carcinoma tissue was compared to analyze the expression of E2F-1，the correlation between clinicopathological parameters and its effect on postoperative survival time. Results Among 79 cases of patients with tumor tissues，E2F-1 positive expression could be found among 39 cases with the positive rate of 49.4%；E2F-1 expression could not be found among 30 cases of patients with para-carcinoma tissue. The positive expression rates of E2F-1 in tumor tissues and adjacent tissues were signif i cantly different（P<0.05）. The expression of E2F-1 was related to AFP level，TNM staging and tumor diameter decrease. With the decrease of AFP level，TNM staging and tumor diameter，the expression of E2F-1 was higher（P<0.05）but it was not related to age，HBsAg infection，GGT and tumor number（P>0.05）. The total survival rates of E2F-1 positive group were 61.5%，59%，46.2% respectively in one，three and fi ve years. The total survival rates of E2F-1 negative group were 37.5%、32.5%、17.5% respectively in one，three and fi ve years. For the comparison among groups，the total survival rates of E2F-1 positive group were all higher than those of the E2F-1 negative group（P<0.05）in one，three and fi ve years. Conclusions E2F-1 shows high expression in hepatocellular carcinoma tissues，the expression level is related to AFP level，tumor diameter and clinical staging.The E2F-e low expression is an independent prognostic factor of overall survival rate after liver cancer operation so that it can be used as an independent prognostic factor after liver cancer resection.

E2F-1 Hepatocellular carcinoma Expression Prognosis

湖北省十堰市科学技术研究与开发项目（16Y46）

442000湖北省十堰市太和医院（李珍）442000湖北医药学院附属人民医院（许涛 程雄飞）

*通信作者