金匮肾气丸调控FNDC5、BMP2对BMSCs成骨分化的作用

张玉卓 任辉 余翔 许银坤 许献光 丁富平 黄进 张进*

1.广州中医药大学, 广东 广州 510405 2.广州中医药大学第一附属医院, 广东 广州 510405

随着年龄的增长，骨髓内微环境的改变，骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)分化成骨细胞数量的减少和成骨能力的减弱[1,2]，造成骨质疏松症(osteoporosis,OP)。临床发现，OP表现在骨量丢失、骨微结构破坏与骨质量降低的同时，骨髓脂肪组织显著增多[3,4]。调节骨髓基质微环境，促进BMSCs成骨分化[5]，对于防治OP具有重要意义。中医学认为肾主骨生髓，因此，探讨补肾方药促进BMSCs成骨分化有一定的临床意义。但其作用机制的相关研究仍然较少，近年来报道FNDC5、BMP2基因在成骨分化过程中起重要调控作用[6,7]。本研究拟采用全骨髓贴壁法培养BMSCs，分别用高、低剂量金匮肾气丸血清和空白血清、和干预BMSCs成骨分化过程，通过CCK8检测、AKP活性检测、ALP染色、RT-q PCR和Western-blotting等方法对金匮肾气丸促BMSCs的成骨分化能力及其作用机制进行了初步探讨。

1 实验材料

1.1 药物

金匮肾气丸:制附子(先煎)6 g、桂枝 6 g、生地黄30 g、山药15 g、山茱萸15 g、泽泻12 g、茯苓12 g、牡丹皮12 g (北京同仁堂股份有限公司提供)。以上药物加水漫过药面2 cm,浸泡30 min后, 先煎附子30 min,再纳入其他药物,大火煮沸后再煎30 min,第2煎加水量为第1煎的1/2,共煎2次,每次煎得药150 mL, 合并煎液,过滤,浓缩至120 mL,高温、高压灭菌,5 ℃冷藏备用。

1.2 动物

SD大鼠24只，雄性，SPF级，3月龄，体质量150～180 g，由广州中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SYXK(粤)2013-0092。

1.3 分组、动物含药血清制备及给药

将24只大鼠随机分成3组(每组8只)，分别为：金匮肾气丸低剂量组(SD组)、金匮肾气丸高剂量组(SG组)和空白对照组(CON组)。……