CRISPR/Cas9敲除pyk2基因对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

汪超甲, 王 辉, 胡钧涛, 胡胜利, 张宇强, 成于思, 雷尚国

1.十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)神经外科, 湖北 十堰 442000; 2.十堰市郧西县人民医院神经外科, 湖北 十堰 442600



CRISPR/Cas9敲除pyk2基因对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

汪超甲1, 王 辉1, 胡钧涛1, 胡胜利1, 张宇强1, 成于思1, 雷尚国2*

1.十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)神经外科, 湖北 十堰 442000; 2.十堰市郧西县人民医院神经外科, 湖北 十堰 442600

为了探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶(proline rich tyrosine kinase2，Pyk2)对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响,设计了2对以pyk2为靶基因的sgRNA片段，以px335质粒为载体,构建CRISPR/Cas9重组质粒，转染至人脑胶质瘤U251细胞中，同时设置野生型U251细胞作为对照组。通过酶切鉴定及Western blot分析筛选阳性单克隆细胞，并测序揭示突变位点。筛选出的阳性单克隆细胞作为实验组，经RTCA法比较后，发现实验组细胞的增殖能力较对照组明显下降，且具有统计学意义(P<0.05)；Transwell小室法及划痕实验的结果均证实，较对照组，实验组细胞的体外侵袭及迁移能力受到明显的抑制，差异显著(P<0.05)。作为验证侵袭能力的代表，基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9，MMP9)在Western blot实验中表达量较对照组也明显下降。通过上述方法成功得到目的基因敲除的稳定细胞株，并证实敲除pyk2基因能明显的抑制人脑胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

CRISPR/Cas9；pyk2基因；人脑胶质瘤细胞；增殖、迁移及侵袭能力

脑胶质瘤是颅内最常见的原发性恶性肿瘤。目前,手术仍是首选的治疗方案，对于高级别的脑胶质瘤来说，术后进行放疗、化疗等辅助治疗将有助于控制肿瘤的复发和转移。但由于其自身呈侵袭性生长、恶性程度高等生物学特点，很难达到彻底治愈。手术治疗并不能彻底切除整个肿瘤组织，放疗、化疗受限于其耐受性和耐药性，也达不到理想的效果。随着对肿瘤发生发展研究的深入，研究者们发现，肿瘤的发生和发展是多个基因在多方面共同作用的结果。……