不同批次四川栽培白芍药材的质量分析研究

高玉莲，陈丽君，方明，徐亚吉，苏双，谭雅丽，梅雪然，李经中

不同批次四川栽培白芍药材的质量分析研究

高玉莲1，陈丽君1，方明1，徐亚吉1，苏双1，谭雅丽1，梅雪然1，李经中2

目的：通过对不同批次四川渠县栽培白芍进行薄层、水分、总灰分、浸出物、重金属及有害元素（铅、砷、汞、铜、铬）检验，及芍药苷含量测定，以评价药材质量。方法：选取10批次四川渠县栽培白芍药材，参照2015年版《中国药典》一部项下检验方法，对其主要指标成分芍药苷的含量，以及薄层、水分、总灰分、浸出物、重金属及有害元素（铅、砷、汞、铜、铬）等检查项进行检验。结果：白芍样品中芍药苷的含量为3.67±0.45%，水分的含量为12.78±0.82%，总灰分的含量为2.93±0.52%, 浸出物的含量为24.32±1.96%，均在标准范围内，且重金属含量均低于其限量值。结论：四川栽培白芍中芍药苷含量，以及薄层、水分、总灰分、浸出物、重金属及有害元素（铅、砷、汞、铜、铬）等检查项均符合2015年版《中国药典》规定，质量合格。

白芍；高效液相色谱法；芍药苷；重金属

白芍来源于毛茛科植物芍药Paeonia lactifloria Pall.的干燥根[1]，具有养血调经、敛阴止汗、平抑肝阳之效，常用于血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗，胁痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕[1]。其主要有效成分芍药苷为解痉[2]、镇痛[3]、抗炎[4,5]的活性成分。药材白芍主产于浙江、安徽、四川、贵州、山东等地，均系栽培品。其中四川地区为三大栽培主产区之一，以中江所产白芍品质最佳，渠县、达州、广安等地亦有大面积栽培[6]。现阶段，四川渠县栽培白芍相关质量分析研究鲜有报道。因此，本试验参照《中华人民共和国药典》（2015年版一部）所载白芍药材质量控制标准，对10批次四川渠县栽培白芍药材进行测定，研究结果可为完善四川栽培白芍质量控制研究，以及川产白芍的临床合理应用提供数据参考。

1 仪器与试药

Waters 2695高效液相色谱仪（HPLC），包括4元泵系统、全自动脱气单元、VWD检测器单元和Waters 2695色谱工作站等（Waters Techology，USA）；SB-100 DT型超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；UPT-II-10T型超纯水器（成都超纯科技有限公司）；FA2004N型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）。

栽培白芍药材购自四川省达州市渠县，经成都大学医学院鉴定为毛茛科植物芍药（Paeonia lacti fl ora Pall.）的干燥根。芍药苷对照品购自中国食品药品检定研究院。乙腈、磷酸为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

取10批次栽培白芍药材，粉碎，过40目筛，混匀。分别称取约0.5 g，置于具塞三角瓶中，加乙醇10 mL，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇l mL使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每l mL含l mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（2015年版《中国药典》四部项下通则0502）试验，吸取供试品溶液和芍药苷对照品溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，置展开缸中，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。置可见光下观察，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，色谱图见图1。

图1 栽培白芍药材薄层色谱鉴别

2.2 水分、总灰分及浸出物检查

2.2.1 水分 取10批次栽培白芍药材，粉碎，过24目筛，混匀。照水分测定法（2015年版《中国药典》四部项下通则0832第二法），分别称取约2～5 g，精密称定，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5 mm，疏松供试品不超过10 mm，开启瓶盖在100～105℃干燥5 h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30 min，精密称定，再在上述温度干燥1 h，放冷，称重，连续两次称重的差异不超过5 mg为止。并根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）。

2.2.2 总灰分 取10批次栽培白芍药材，粉碎，过24目筛，混匀。照总灰分测定法（2015年版《中国药典》四部项下通则2302），分别称取约2～3 g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量，缓缓炽热至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重，并根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。

2.2.3 浸出物 取10批次栽培白芍药材，粉碎，过24目筛，混匀。照水溶性浸出物测定法（2015年版《中国药典》四部项下通则2201），分别称取约4 g，精密称定，置250 mL的锥形瓶中，精密加水100 mL，密塞，冷浸，于前6 h内不断振摇，再静置18 h，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量，并以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（%）。

上述三项检查结果表明10批次栽培白芍药材中水分、总灰分、浸出物含量均符合规定，见表2。

表2 10批次栽培白芍药材中水分、总灰分及浸出物的含量测定结果

2.3 重金属与有害元素检查

参照2015年版《中国药典》一部项下白芍药材重金属及有害元素测定方法，照电感耦合等离子体质谱法（通则0412）测定。

2.3.1 标准品溶液的制备 分别精密量取铅、砷、镉、汞、铜单元素标准溶液适量，用10%硝酸溶液稀释制成每1 mL分别含铅、砷、镉、汞、铜为1 μg、0.5 μg、1 μg、1 μg、10 μg的溶液，即得标准品贮备溶液。

精密量取铅、砷、镉、铜标准品贮备液适量，用10%硝酸溶液稀释制成每1 mL含铅、砷0 ng、1 ng、5 ng、10 ng、20 ng，含镉0 ng、0.5 ng、2.5 ng、5 ng、10 ng，含铜0 ng、50 ng、100 ng、200 ng、500 ng的系列浓度混合溶液。另精密量取汞标准品贮备液适量，用10%硝酸溶液稀释制成每1 mL分别含汞0 ng、0.2 ng、0.5 ng、1 ng、2 ng、5 ng的溶液，即得标准品溶液。

2.3.2 内标溶液的制备 精密量取锗、铟、铋单元素标准溶液适量，用水稀释制成每1 mL各含1 μg的混合溶液，即得内标溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备 取10批次栽培白芍药材于60℃干燥2 h，粉碎成粗粉，取约0.5 g，精密称定，置耐压耐高温微波消解罐中，加硝酸5～10 mL，密闭并进行消解。消解完全后，消解液冷却至60℃以下，放冷，将消解液转入50 mL量瓶中，用少量水洗涤消解罐3次，洗液合并于量瓶中，加入金单元素标准溶液（1 μg﹒mL-1）200 μg，用水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.3.4 样品测定 测定时，63Cu、75As以72Ge作为内标，114Cd以115In作为内标，202Hg、208Pb以209Bi作为内标，分别对各个浓度的标准液溶液进行测定，并计算得到样品中铅、砷、镉、汞、铜5种元素的含量。结果表明10批次栽培白芍药材中重金属及有害元素含量均低于规定限度，符合标准，见表3。

表3 10批次栽培白芍药材中重金属及有害元素的含量测定结果

2.4 含量测定

参照2015年版《中国药典》一部项下白芍药材含量测定方法，采用高效液相色谱法（通则0512）测定。

2.4.1 色谱条件 色谱柱，Kromasil C18色谱柱（5 μm，250×4.6 mm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14：86）；流速：1.0 mL﹒min-1；柱温：30℃；检测波长：230 nm；进样量：10 μL。

2.4.2 对照品溶液的制备 称取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每1 mL含60 μg的对照品溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备 分别取10批不同批号（S1—S10）的栽培白芍药材，粉碎，过40目筛，取0.1 g，精密称定，置50 mL容量瓶，精密加入稀乙醇35 mL，超声处理30 min（45 kHz），放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，分别取1 mL样品溶液过0.45 μm微孔滤膜，即得供试品溶液。

2.4.4 样品测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，色谱峰见图2，含量测定结果见表4。

表4 10批次栽培白芍药材中芍药苷的含量测定结果

图2 栽培白芍药材（S1）和芍药苷对照品（St）的HPLC色谱图

3 分析与讨论

本文采用2015年版《中国药典》一部项下对白芍药材的质量检查方法对10批次四川达州市渠县的栽培白芍进行品质评价研究，结果表明其质量控制成分芍药苷的含量为3%～5%，是药典中所规定的含量限度的2倍以上，10批次样品的薄层色谱鉴别以及水分、总灰分、浸出物、重金属及有害元素等检查项均符合药典规定，其中重金属及有害元素（铅、砷、镉 、汞、铜）含量明显低于药典规定限度，具有较好药材质量和较高安全性，可用于药物制剂的临床应用。含量测定结果亦显示栽培白芍以2～3年生长年限较为适宜，其主要有效成分芍药苷含量较高。本试验研究结果可为进一步完评价完善栽培白芍药材质量控制标准及其栽培技术发展，开展中药临床疗效评价等研究提供依据。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2015版一部[S].北京：中国医药科技出版社,2015,(1)：105.

[2] 彭珍香,黄海定,邓时贵.芍药苷对大鼠离体胸主动脉血管环的作用及其机制[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(7)：190-193.

[3] Yu H Y,Mu D G,Chen J,et al. Suppressive effects of intrathecal paeoni fl orin on bee venom- induced pain- related behaviors and spinal neuronal activation [J].Pharmacology,2011,88(3/4)：159.

[4] 刘玲,李瑞芳,王等,等.芍药苷减轻LPS致小鼠急性脑损伤的抗炎机制[J].中药材,2016,39(2)：411-414.

[5] 汪斌,朱向东,段永强,等.芍药苷对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织病理形态及血清抗炎和促炎因子平衡的影响[J].中国中西医结合消化杂志,2013,21(1)：1-4.

[6] 李远志.川西地区芍药资源与品质评价[D].四川：四川大学,2006：11-17.

Quality analysis of cultivated Paeoniae Radix Alba in Sichuan/

GAO Yu-lian1, CHEN Li-jun1, FANG Ming1, XU Ya-ji1,SU Shuang1, TAN Ya-li1, MEI Xue-ran1, LI Jing-zhong2//(1.Metabonomics Synergy Innovation Laboratory, School of medicine of Chengdu University, Chengdu,610106, Sichuan; 2. Quxian Xinshi Gonghe Chinese Herbal Medicine Farmers' Professional Cooperatives, Dazhou 635200, Sichuan)

Objective: To evaluate the quality of different batches of cultivated Paeoniae Radix Alba in Sichuan by thin layer chromatography and investigating moisture, total ash, extract, the heavy metals and harmful elements . Method: The quality control methods of Chinese Pharmacopeias (2015) were used to test the contents of paeoni fl orin, moisture, total ash, extract, the heavy metals and harmful elements(lead, arsenic, mercury, copper and chromium) in 10 batches of samples. Result: The contents of paeoni fl orin, moisture, total ash, extract in samples were 3.67±0.45%, 12.78±0.82%, 2.93±0.52%, 24.32±1.96%, respectively,which were in the standard range And the heavy metals and harmful elements contents were lower than the limits prescribed in pharmacopoeia. Conclusion: All the quality inspection items of Paeoniae Radix Alba cultivated in Sichuan conform to the standards in Pharmacopeias of China(2015). The results show the quality of cultivated paeoniae Radix Alba in Sichuan is good.

Paeoniae Radix Alba; HPLC; paeoni fl orin; heavy metal

R282.2

A

1674-926X(2017)04-002-03

四川省科技厅科技支撑计划项目（2014SZ0132）

1. 成都大学医学院代谢组学协同创新实验室，四川 成都 610106; 2. 渠县新市贡和中草药农民专业合作社，四川 达州 635200

高玉莲，女，临床医学本科在读

Email：1436513052@qq.com

方明，男，讲师，从事生理学教学科研工作

Email：383962472@qq.com

2016-09-26

（责任编辑：胡慧玲）