大剂量岷 当归对高同型半胱氨酸血症兔TXB2的影响

王晓萍，周明旺，徐 霞

（甘肃省中医院/甘肃中医药大学第一附属医院，甘肃 兰州 730050）

血浆中升高的同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）水平与心脑血管疾病有着非常密切的联系。研究证实，高同型半胱氨酸（Hypohomocysteinemia，HHcy）可激活血管壁炎症发生而导致动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）［1］，HHcy血症为AS和血栓形成等心脑血管疾病发病的独立危险因子［2］，作用于AS发生发展的各个环节［3］。研究表明，以重用岷当归配伍组方的系列制剂如中风膏、补脑膏、佛手瓜蒌胶囊等治疗心脑血管疾病如脑卒中、缺血性心脏病、动脉粥样硬化疾病有显著疗效［4-6］。岷当归最高用量达120g，远高于《中华人民共和国药典》规定用量（6～12g）［7］，且临床疗效好，无不良反应［8］。本研究观察大剂量岷当归（60～120g）对HHcy兔血清Hcy与血浆TXB2的影响，以期为岷当归的新药研发提供理论依据。

1 材料与方法

试剂：DL-蛋氨酸，购自Sigma公司。同型半胱氨酸（Hcy），购自北京中生生物工程技术公司。血栓素B2（TXB2）放免测试药盒购自北京北方生物技术研究所。岷当归中药饮片均购自岷县中药材有限公司。

药物：岷当归水煎液药剂实验室制备，依据传统方法煎煮、过滤，浓缩成0.5g/mL合剂备用。叶酸5mg/片，批号H12020597，天津飞鹰制药有限公司生产。维生素B610mg/片，批号H12020170，天津力生制药股份有限公司生产。维生素B1225mg／片，批号H14023321，山西云鹏制药有限公司生产。

仪器：手术刀剪刀、电子分析天平、低速离心机、切片机、显微镜及照相摄像系统、微量移液器、超低温冰箱、酶标仪、放免检测仪。

实验动物：成年健康普通级日本大耳白兔48只，雌雄各半，4月龄，体质量2.0～2.5 kg，由中国农业科学院兰州兽医研究所提供，动物合格证号SCXK（甘）2010-0001。动物饲养于温度18～24℃、光照明暗各12h清洁的饲养室内，分笼喂养。

动物分组与模型制备：48只兔适应性喂养1周，随机分6组：正常组、模型组、岷当归低、中、高剂量组和叶酸对照组，每组各8只。各组兔均限食量，每兔每日100g。动物模型参照孟磊等［1］的方法制作，背部皮下注射L-蛋氨酸80mg/（kg·d），连续12周，标准兔饲料喂养。正常组在背部皮下注射与模型组等容量的生理盐水，标准兔饲料喂养。其他各治疗组进行造模。12周末终止实验。

干预方法：兔日灌胃液体用量为10mL/（kg·d），各治疗组造模第8周开始灌胃，共4周。岷当归低、中、高剂量组：给予不同剂量岷当归水煎液灌胃，按体型系数换算法中人兔等效药量换算方法计算给药剂量，人用岷当归水煎液低、中、高剂量为30g/70kg、60g/70kg、120g/70kg，按70kg成年人的药物剂量与1.5kg家兔之间的换算系数为0.07，实验兔低、中、高剂量组1.4g/（kg·d）、2.8g/（kg·d）、5.6g/（kg·d）。叶酸组参照文献［10］给予叶酸、维生素B6、维生素B12研碎后灌胃，叶酸1.5mg/（kg·d）、维生素B620mg/（kg·d）、维生素B120.25mg/（kg·d）。正常组、模型组每天予以等量灭菌水灌胃。

观察指标：末次给药后24h禁食，不禁水，3%戊巴比妥钠30mg／kg耳缘静脉注射麻醉，打开腹腔，下腔静脉取血9mL，离心后分别取血清、血浆备用。酶标仪ELISA法测定Hcy，放射免疫法测定血浆TXB2。

统计方法：用SPSSl7.0统计软件进行统计分析。计量资料以（±s）表示，用独立样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

对血清Hcy水平的影响：各组血清HCY指标见表1。

表1 各组血清Hcy指标比较 （μmol/L， ±s）

表1 各组血清Hcy指标比较 （μmol/L， ±s）

注：与正常组比较，★P＜0.05；与模型组比较，※P＜0.05；与叶酸组比较，▲P＜0.05；与中剂量组比较，☆P＜0.05；与高剂量组比较，＃P＜0.05。

组别 例 Hcy正常组 8 12.72±2.43模型组 8 18.55±2.66★叶酸组 8 14.73±1.42※低剂量组 8 16.50±2.02※▲☆＃中剂量组 8 14.83±1.69※高剂量组 8 14.64±2.17※

对血浆TXB2水平的影响：各组血液TXB2指数见表2。

表2 各组血浆TXB2指标比较 （pg/mL，±s）

表2 各组血浆TXB2指标比较 （pg/mL，±s）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，※P＜0.05；与叶酸组比较，▲P＜0.05；与低剂量组比较，＃P＜0.05；与中剂量组比较，☆P＜0.05。

组别 例 TXB2正常组 8 1 054.72±20.22模型组 8 1 979.10±24.46*叶酸组 8 1 516.20±18.39※＃☆低剂量组 8 1 376.83±16.82※▲中剂量组 8 1 293.24±25.18※▲高剂量组 8 1 118.48±21.53※▲＃☆

3 讨 论

Hcy是存在于血浆中的氨基酸，也是半胱氨酸与蛋氨酸代谢中的中间产物之一。在正常人体内，Hcy的生成和代谢保持着平衡，血浆中Hcy浓度为5～15μmol/L［11］。因环境因素或遗传因素而导致Hcy持续性超高称之为HHcy。高Hcy水平可导致血管内皮损伤，血管平滑肌细胞增殖，血小板活化，脂类代谢紊乱，诱导炎症反应发生等作用［12］。Hcy代谢产生一些活性氧化中间产物，作用于细胞膜，启动脂质过氧化反应，损伤血管内皮西部功能，触发血小板活化，引起平滑肌细胞增殖，诱导AS发生［13］。Hcy升高水平与血小板活化状态呈明显的正相关，Hcy增加和血小板活化是AS过程中血栓形成的重要的病理生理基础［14］。活化的血小板可释放多种炎症介质，如血小板活化因子、血栓素、血小板生长因子衍生物等，还能产生氧自由基，导致组织损伤。TXB2血小板活化后花生四烯酸代谢产物之一，是TXA2的稳定代谢产物，也是促进凝血和血栓形成的重要因素，是与脑梗死发生、发展密切相关的一种炎症介质，国内外均以测定TXB2作为判断其浓度的指标［15］。

中医认为，痰浊阻滞，则易形成血瘀，血瘀阻滞则使津液停蓄化而为痰，而导致Hcy在体内蓄积，造成Hcy和类似AS的病变，引发中风、冠心病等疾病。当归扩张血管、抗血小板聚集、保护血管内皮细胞、抗氧化、清除自由基和改善血液流变学等具有良好作用［16］。当归小剂量应用则补血，大剂量应用则活血［17］。研究表明岷当归的水分含量、醇溶出物的含量、挥发油含量等均优于其他产地当归的质量［18～20］。甘肃岷县全当归抗血小板聚集及抗凝血方面优于其他产地［21］。

研究结果显示，模型组血清Hcy与血浆TXB2水平较正常组显著升高，提示Hcy升高触发血小板活化。岷当归单日剂量为30g～120g，各剂量组均能使血清Hcy、TXB2水平下降，岷当归各剂量组优于叶酸组，高剂量组优于低、中剂量组。因此，大剂量岷当归可降低HHcy兔血清Hcy、TXB2指标，减少Hcy对血管内皮的损伤以及抑制Hcy触发的血小板活化是其作用机制之一，作用与剂量有一定的相关性，剂量较大时作用明显。

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