大黄酸对高糖诱导的大鼠肾脏系膜细胞的PPARγ信号通路的调控

段淑芳 胡江

浙江省中医药大学第二附属医院内分泌科（杭州 310005）

糖尿病肾病（DN）是全球终末期肾病的主要原因，终末期肾病有54%来自糖尿病肾病［1］。糖尿病肾病的发生、发展与炎症反应所致胰岛素抵抗密切相关［2］。前期研究已证实，大黄酸可以通过减少尿白蛋白排泄量，减缓血肌酐水平的升高，延缓糖尿病肾病发展，但是具体机制不明确［3］。本研究通过体外实验，观察大黄酸对高糖诱导的大鼠肾脏系膜细胞（mesangial cell，MsC）凋亡率及相关信号蛋白氨基末端激酶（p-JNK）和氧化物酶体增殖体激活受体γ（PPARγ）表达的调控，阐述大黄酸延缓糖尿病肾病发展的可能机制，为糖尿病肾病防治和大黄酸的进一步开发奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 药材及制备大黄酸（批号：20121220，纯度：≥98%）购自上海源叶生物科技有限公司，经本校中药鉴定室鉴定属正品。大黄酸用二甲基亚砜（DMSO）溶解后，加入无血清DMEM稀释，并经0.22 μm过滤消毒备用。DMSO终浓度小于0.01%，以0.01%DMSO作为溶剂对照组，实验显示溶剂对细胞无毒性作用。

1.2 主要试剂与仪器DMEM培养基（GIBCO，USA）（每升含10%胎牛血清，100 U/mL的青霉素，100 μg/mL的链霉素，2 mmol/L的L-谷氨酰胺，100 μM的非必需氨基酸，1 mmol/L的丙酮酸，pH 7.4）；胰酶（MERCK，USA）；Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit（Bender Med System）；p-JNK（Thr183/Tyr185）（98F2）Rabbit mAb 和PPARγ（81B8）Rabbit mAb（Cell Signaling Technology，MA，USA）；GAPDH（Santa Cruz，CA，USA）。RT-PCR试剂盒（TAKARA）；PPARγ引物、BcL-2引物、β-Actin（Invitrogen）。

1.3 方法

1.3.1 大鼠MsC的体外培养细胞株MsC购自上海复蒙基因生物科技有限公司，低糖（5.5 mmol/L）DMEM培养液常规传代保存。

1.3.2 实验分组将生长良好的MSC调整细胞比例为2×106/培养皿，接种于100 mm dishes，待24 h后细胞长满，弃上清更换为无血清培养基，随机分组为：（1）正常对照组（MsC无任何诱导剂）；（2）模型组：MsC+高糖（30 mmol/L）DMEM培养基；（3）MsC+30 mmol/L高糖+大黄酸（250 μg/mL）；（4）MsC+30 mmol/L 高糖+大黄酸（125 μg/mL）；……