浅析影响注射用水溶性维生素中B12含量的因素

2018-06-21 08:07査文勇陆晓燕赵双双
机电信息 2018年17期
关键词:水溶性注射用不锈钢

査文勇 陆晓燕 赵双双

(上海上药第一生化药业有限公司,上海200240)

0 引言

维生素B12,又称为钴胺素,是唯一含有金属元素的维生素。自然界中的维生素B12都是微生物合成的,高等植物和动物不能制造维生素B12。同时,维生素B12是唯一一种需要肠道分泌物(内源性因子)帮助才能被吸收的维生素。有些人由于肠胃异常,缺乏这种内源性因子,即使有足够的食物来源,他们仍会患上恶性贫血。在目前已知的植物性食品中基本上都不含有维生素B12,且其停留在肠道的时间很长,大约需要3h(大部分水溶性维生素只需几秒钟)才能被吸收。

维生素B12的主要生理功能是参与制造骨髓红细胞,预防恶性贫血以及脑损伤。维生素B12是浅红色针状结晶,易溶于水和乙醇,但是不溶于丙酮、乙醚或氯仿。其在pH值为4.5~5.0的弱酸条件下最稳定,在强酸(pH=2)或碱性溶液中会分解,遇热会少量受损,但短时间的高温消毒损失小,遇强光或紫外线易被破坏,普通蒸煮过程的损失量约为30%。

本文主要考察影响注射用水溶性维生素中B12含量的因素,通过比较两种不同的配制方法,择优选取其中一种,使得产品的合格率得到显著提升。

1 实验材料和设备

1.1 实验材料

1.1.1 处方组成

注射用水溶性维生素的处方组成如表1所示。

1.1.2 试剂

磷酸二氢钾(批号20170109),国药集团化学试剂有限公司;乙腈(批号17070452),TEDIA公司;10%盐酸溶液(批号170922)、磷酸二氢钾(批号T20100804),国药集团化学试剂有限公司;磷酸氢二钾(批号F20100813),国药集团化学试剂有限公司;磷酸(批号20170109),国药集团化学试剂有限公司。

1.1.3 对照品

烟酰胺(含量99.9%),批号100115-201604;硝酸硫胺(含量99.8%),批号100297-201402;盐酸吡哆辛(含量100.0%),批号100116-201404;泛酸钠(含量99.9%),批号100279-201203;维生素C钠(含量99.9%),批号100296-201104;维生素B12(含量90.2%),批号100248-201203。

1.2 仪器和设备

不锈钢钢桶、搅拌棒、不锈钢钢勺、玻璃棒、烧杯、不锈钢杯子、剪刀、不锈钢棒;Agilent1200型高效液相色谱仪,安捷伦公司;ME104型天平、AB135-S型天平,梅特勒公司。

表1 处方组成

2 方法和结果

2.1 配制方法和测定方法

2.1.1 配制方法

2.1.1.1 方法1配制过程

(1)准确称取配制总量80%的注射用水(水温控制在65~70℃)置于160L不锈钢桶中,通氮气(有气体冒出即可)5min后,分别取其中的1L注射用水置于两只塑料勺中(水温控制在60~65℃),将配制量的维生素B12(注意避光)加入至塑料勺中,用玻璃棒不断搅拌5min后沉淀约5min,视其全部溶解,将配制量的生物素加入至另一塑料勺中,用玻璃棒搅拌使其全部溶解,混合后即得溶液1。

(2)将配制量的甘氨酸、尼泊金甲酯、依地酸二钠、核黄素磷酸钠(注意避光)、烟酰胺、叶酸、硝酸硫胺、盐酸吡哆辛、右旋泛酸钠,按顺序逐一投入至上述160L的不锈钢桶中,每投一种原辅料后均需充分搅拌均匀,使其全部溶解,然后再投入下一个原辅料,溶液搅拌均匀后,即得溶液2。

(3)仔细观察溶液1药液澄清后,将其并入溶液2中,并用不锈钢棒搅拌均匀后得到溶液3。

(4)准确称取配制总量20%的注射用水(水温控制在30~40℃)置于40L不锈钢桶中,通氮气(有气体冒出即可)5min,将配制量的维生素C钠投入其中,并用不锈钢棒搅拌均匀,使其溶解,然后并入溶液3(水温控制在30~40℃)中,通氮气(有气体冒出即可)5min,并搅拌均匀。

(5)QA人员取样后,送给质量检验员进行中间体(药液)的分析,测pH值。

2.1.1.2 方法2配制过程

(1)准确称取配制总量80%的注射用水(水温控制在60~70℃)置于配液罐中,通氮气(有气体冒出即可)5min后,取其中的1L注射用水置于玻璃烧杯中,将处方量的生物素加入至玻璃烧杯中,用玻璃棒搅拌使其全部溶解,即得溶液1。

(2)在配液罐中加入处方量的甘氨酸,搅拌使其完全溶解,再依次加入处方量的对羟基苯甲酸甲酯、依地酸二钠、核黄素磷酸钠(注意避光)、烟酰胺、叶酸、硝酸硫胺、盐酸吡哆辛、泛酸钠,按顺序逐一投入至上述配液罐中,每投一种原辅料后均需充分搅拌均匀,使其全部溶解,然后再投入下一个原辅料,溶液搅拌均匀后,即得溶液2。

(3)仔细观察溶液1药液澄清后,将其并入溶液2中,搅拌并降温至20~30℃。

(4)准确称取配制总量20%的注射用水(水温控制在20~30℃)置于不锈钢桶中,通氮气(有气体冒出即可)5min后,取其中的1L注射用水置于玻璃烧杯中,将处方量的维生素B12(注意避光)加入至玻璃烧杯中,用玻璃棒搅拌使其全部溶解,并继续搅拌10min,即得溶液3。

(5)将处方量的维生素C钠投入至上述不锈钢桶中,并搅拌均匀,使其溶解,然后将该溶液并入配液罐。

(6)仔细观察溶液3药液澄清后,将其并入配液罐中,并用不锈钢棒搅拌均匀后,通氮气(有气体冒出即可)5min,搅拌均匀(约10min),测定其pH值应在5.8~6.1。

2.1.2 维生素B12测定

2.1.2.1 色谱条件

维生素B12测定方法的色谱条件如表2所示,梯度比例如表3所示。

2.1.2.2 溶液配制

(1)对照品溶液:取维生素B12对照品约25mg,精密称定,置于250mL量瓶中,加水溶解稀释至刻度,摇匀;精密量取1mL,置于100mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。(2)供试品溶液:取本品5瓶,用适量水溶解后转移至同一25mL量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得。平行配制两份供试品溶液。

2.1.3 测定法

2.1.3.1 空白试验

取冷却至常温的注射水,至少进样1针,确认其对测试无干扰。

2.1.3.2 系统适用性试验

取对照品溶液,连续进样5针,记录色谱图,计算维生素B12峰面积平均值及RSD值,RSD值应不大于2.0%。理论塔板数以维生素B12峰计算,应不低于2000,维生素B12与未知峰之间的分离度应该大于1.0。

表2 色谱条件

表3 梯度比例

2.1.3.3 供试品溶液的测定

取供试品溶液,每份溶液进样1针,记录色谱图。

2.1.4 计算与结果判断

以外标法计算:

式中——连续5针对照品溶液主峰平均峰面积;

Ax——供试品溶液主峰峰面积;

Cr——对照品溶液的浓度,mg/mL;

mr——标准品称样量,mg。

每瓶注射用水溶性维生素中含维生素B12应为4.5~6.0μg。

2.2 实验结果

注射用水溶性维生素的两种配制方法中,维生素B12的含量测定结果如表4所示。

2.3 液相图谱

对每批样品都做了两遍平行实验,从液相图谱(由于篇幅有限,本文不再赘述)中可以看出,得出的结果是一致的,说明测定结果是可靠的。

3 结语

从以上分析结果可以看出,配制方法1明显优于方法2,说明维生素C钠可能影响维生素B12的稳定性。此外,在方法1中主要控制了维生素C钠溶液的温度以及维生素C钠溶液加入维生素B12混合前的温度,这样可以极大地避免维生素C钠对维生素B12造成损害,说明方法1的配制工艺科学、合理、有效,既能生产出合格稳定的产品,又能降低生产风险,帮助企业提高经济效益。

表4 注射用水溶性维生素的两种配制方法结果

从表4可以看出:用方法1配制出来的注射用水溶性维生素中的B12含量基本上能够达到5.0μg以上;而用方法2配制出来的注射用水溶性维生素中的B12含量基本上都未能够达到5.0μg。由此说明,配制方法1明显优于方法2。

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