PM2.5促进Th9细胞分化及在哮喘发病中作用的初步研究

付劲蓉 孙立成 夏 莉 刘丽娟 黄赛花 韩 晓 周玉峰,2

哮喘是在遗传易感背景下由过敏原和环境因素相互作用而引起的一种免疫炎症性疾病[1]。近年来受环境污染的影响，哮喘的发病率呈逐年上升趋势[2～4]。流行病学研究结果显示，PM2.5与哮喘发病率增加、症状加重及急诊就诊率上升相关，但PM2.5通过何种机制诱发和(或)加重哮喘尚不清楚[5,6]。Th9细胞是近年来新发现的T细胞亚群，是在转化生长因子-β(TGF-β)及IL-4联合刺激下分化而来，以分泌大量IL-9为主要特点，与哮喘的发生发展密切相关[7,8]。本研究利用蟑螂提取物(CRE)建立过敏原致敏的小鼠哮喘模型，以此模型进一步研究PM2.5暴露对小鼠气道炎症、支气管高反应性、Th9细胞的影响，为阐明环境污染与哮喘发作的关系及哮喘的防治提供实验证据。

1 方法

1.1 实验动物 SPF级C57BL/6雌鼠，6～8周龄，体重18～20 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，饲养在复旦大学实验动物科学部。饲养环境符合SPF级环境设施标准。实验方案得到了复旦大学附属儿科医院(我院)伦理委员会的批准。

1.2 PM2.5采集 ZR-3930型环境空气颗粒物采样器(青岛众瑞智能仪器公司)置于我院科研楼顶楼，连续采集2017年10～12月份的大气PM2.5。将采有PM2.5的石英膜裁剪为1 cm×3 cm大小，浸入三蒸水中超声振荡1 h。用70 μm的过滤网过滤振荡液，滤液冷冻真空干燥，灭菌，低温保存备用。

1.3 哮喘小鼠模型的建立方法 采用本实验室已经发表的方案[9]：将20 μg CRE(购自美国 GREER Laboratories)于D0～D4气管内分别注射致敏5次(致敏阶段)，D10～13气管内分别刺激4次(激发阶段)，D14处死(图1)。处死后收集肺泡灌洗液和肺组织备用。……