PCR技术结合试纸条法快速检测乳粉中的克鲁诺杆菌

姜霞，王蕊,潘瑞丽，孙露宏，李明雨，党芳芳，赵玥明，曲艳艳，满朝新，姜毓君b

(东北农业大学a.食品学院,乳品科学教育部重点实验室；b.国家乳业工程技术研究中心，哈尔滨150030)

0 引言

婴幼儿配方奶粉为婴幼儿提供了生长发育营养成分的同时，其安全性受到广泛关注[1]。克鲁诺杆菌（原阪崎肠杆菌）[2-3]，能够引起新生儿脑膜炎，脓毒血症等，致死率高达40%～80%[4]。而婴幼儿配方奶粉作为克罗诺杆菌生长的天然培养基，是婴幼儿患病的主要渠道[5-6]，因此快速检测该菌具有重要意义。传统的检测方法耗时长，结果呈现慢[7-8]。而迅速发展的PCR法技术检测时间相对短，灵敏度较高[9-11]。其结果通过电泳进行分析，容易导致机体致癌致突变[12]，因此试纸条方法通过抗体的结合使用，特异性强[13]。目前针对克鲁诺杆菌设计的PCR产物结合试纸条方法并未报道。本研究特异性识别PCR产物的方式来进行克鲁诺杆菌的特异性检测，为食源性致病菌的快速检测提供理论依据。

1 实 验

1.1 材料

培养基及主要试剂：胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA），琼脂粉，缓冲蛋白胨水(BPW)，2×Taq PCR MasterMix，琼脂糖，细菌全基因组DNA提取试剂盒，婴幼儿配方奶粉，胶体金。

仪器与设备：Bcn1360型生物超净工作台，TGC-16G型离心机，DHP-9272型电热恒温培养箱，电热恒温水浴锅，高压蒸汽灭菌锅，9700 PCR扩增仪，DYY-10C型电泳仪，UVP凝胶成像系统，点膜仪，切割机。

1.2 方法

1.2.1 引物序列

针对ompA基因设计克罗诺杆菌的特异性引物，引物序列如下。

表1 PCR引物序列

1.2.2 菌种的培养和DNA的提取

选取阪崎克鲁诺杆菌ATCC29544作为实验菌……