ATP酶组织化学染色孵育方法比较

宋艳，宋美仪，关伟明

(中山大学附属第一医院病理学教研室，广州 510080)

在肌纤维形态学分型研究和肌肉疾病病理诊断上，采用新鲜肌肉标本进行经典ATP酶组织化学染色非常重要。ATP酶组织化学主要原理是钙激活法[1]，当新鲜肌肉组织中的三磷酸腺苷酶被三磷酸腺苷水解为二磷酸腺苷和磷酸时候磷酸与钙离子结合，在酶活性处形成无色的磷酸钙，磷酸钙经氯化钴处理，形成磷酸钴，再经硫化铵处理便形成棕黑色的硫化钴沉淀在酶活性部位。采用新鲜肌肉组织做相关病理学检查，因为组织本身时效要求严格，但是在肌肉各种特殊染色实验操作中的步骤繁复且需时较长，所以实验者们一直在临床运用中不断的改进和完善。如何在简化或者改进步骤的同时，保证染色结果的稳定有效性是基本条件。现收集我院2017年送到我科做肌肉活检的病例，比对不同孵育方法下染色结果总结各种方法的优缺点。

材料和方法

1 取材与冷冻切片

由本院临床科室取新鲜肌肉组织，注意取其横断面，直径约5～7mm，不加任何固定液，用生理盐水浸过的纱布包好，切忌不能在室温下过夜，送检病理科。把盛有异戊烷的50ml离心管置于液氮中，见有白色凝结物时镊子夹住肌肉组织放入冷冻约30s。然后装入冻存管中置液氮中保存或马上放进-25℃冷冻切片机切片。切片厚度为6～8μm。

2 主要试剂的配制

Tris-钙缓冲液：Tris（Hydroxymethyl）methylamine 3.025g；氯化钙0.499g；去离子水加至250ml；现配现用。酸性前孵育液：（pH4.35）乙酸钠0.2mol/L 9ml，乙酸0.2mol/ L 21ml，调pH至4.35，碱性前孵育液：Tris-钙缓冲液30ml，以0.1mol/L HCl仔细调至pH 10.4；……