白花丹素通过PI3K/AKT/mTOR通路增强PF方案杀伤舌鳞癌细胞

周凡 潘淑婷 邱嘉旋

舌鳞状细胞癌是口腔癌中最常见的恶性肿瘤，其恶性程度较高且容易复发[1]。新辅助化疗PF方案，即手术或放疗前采用顺铂+5-氟尿嘧啶化疗，是舌鳞癌综合治疗的重要部分，能提高患者生活质量和远期生存率[2]。但仍有部分肿瘤对化疗药物不敏感并出现耐药现象严重影响其疗效[3]。细胞自噬是广泛存在于真核细胞内的一种依赖溶酶体降解途径，它是不同于凋亡的一种II型程序性死亡方式，可通过吞噬、降解细胞内损伤、衰老的蛋白或器官维持基因完整性和细胞稳态。自噬活性改变与肿瘤的发生发展相关[4]。少量的细胞自噬可介导肿瘤细胞存活，过量的细胞自噬可介导肿瘤细胞自噬性死亡[5]。

白花丹素是从白花丹根茎中分离的一种醌类成分，具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性[6]。对多种肿瘤细胞均有杀伤作用，对正常细胞无明显毒性[7]。本课题组前期研究发现白花丹素能够增强术前PF化疗方案对舌鳞癌细胞的杀伤作用[8]，其作用机制尚未报道，本研究探讨白花丹素对PF化疗方案杀伤舌鳞癌CAL27细胞凋亡和自噬的作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 材料

DMEM高糖培养基(12100-500)、MTT(M8180)、DMSO(D8370)、蛋白提取试剂盒(PC0020)(北京索莱宝公司)；胎牛血清(TBD 11-HT，TBD生物公司)；白花丹素(481-42-5，Sigma公司，美国)；顺铂(国药准字H37021358，山东齐鲁制药厂)；5-氟尿嘧啶(国药准字H32022246，南通精华制药有限公司)；IGF-1(100-11-100)、β-actin一抗(14439-1-AP)(Proteintech公司，美国)；MHY1484(HY-B0795，MCE®，美国)；凋亡试剂盒(KGA106，南京凯基生物有限公司)；Cyto-ID®自噬检测试剂盒(ENZ-51031-0050，ENZO公司，美国)；Beclin1(3495S)、LC3B(3868S)、PI3K(4249)、AKT(4691S)、p-AKT(Ser473)(4060)、mTOR(2983T)、p-mTOR (Ser2448)一抗(5536)(CST公司，美国)；山羊抗兔二抗(ZB-2301、中杉金桥)。……