慢性乙型肝炎病毒携带者血清GP73水平与肝组织病理学变化的关系研究*

周志凌，印倩

2016年我国1～59岁人群HBsAg携带率为7.18%[1-3]。高尔基体蛋白 73（golgiprotein-73，GP73）是Ⅱ型高尔基体跨膜蛋白，被认为是肝细胞癌（HCC）潜在的血清标志物[4]。近年来，研究发现GP73蛋白在急慢性肝病患者血清水平升高，并与慢性肝脏疾病的病情进展有关[5-8]。本研究检测了慢性HBV感染者血清GP73水平，旨在探讨血清GP73水平对患者肝组织炎症损伤的预测价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2014年1月～2016年12月在我院治疗的慢性HBV感染者450例，其中慢性HBV携带者150例，男性105例，女性45例，年龄为21～62岁，平均年龄（36.5±9.8）岁；慢性乙型肝炎患者150例，男性109例，女性41例，年龄25～68岁，平均年龄（36.0±8.0）岁；乙型肝炎肝硬化患者150例（失代偿期90例，代偿期60例），男性113例，女性 37例，年龄 34～70岁，平均年龄（40.1±10.3）岁；符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》的诊断标准[9]。纳入患者，1）血清HBsAg阳性＞6个月；2）血清 HBV DNA＞1×104copies/ml；3）在 1 年内连续随访慢性HBV携带者3次以上，肝功能正常；4）失代偿期肝硬化患者Child-Pugh评分为B级或C级，代偿期患者Child-Pugh评分为A级。排除标准：1）合并妊娠或哺乳期妇女；2）有严重的心、肾和脑疾病；3）自身免疫学肝病；4)药物或酒精性肝病；5）入组前6个月内应用过核苷（酸）类似物或其他免疫调节剂。另选同期在我院体检的健康人50例作为对照，男性35例，女性15例，年龄26～65岁，平均年龄（35.1±6.9）岁。本研究经我院医学伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 血清GP73水平测定采用ELISA法检测[10]（试剂盒购于上海江莱生物科技有限公司，美国伯腾仪器有限公司Synergy2酶标仪），在450 nm波长下读取OD值，绘制标准曲线，计算GP73水平。

1.3 肝活检 使用16 G穿刺针（美国巴德公司），进行肝组织活检，标本长度至少在1.5 cm，标本经5%甲醛固定，石蜡包埋，使用切片机（德国莱卡公司）切片，行苏木精-伊红染色。在显微镜（奥林巴斯BX50）下观察至少6个汇管区。采用Metavir评分对肝脏炎症和纤维化程度进行评价。肝脏炎症活动度分为5级：即G0：无炎症活动；G1：轻度炎症活动；G2：中度炎症活动；G3：中 /重度炎症活动；G4：重度炎症活动；肝纤维化分为4级：即S0：纤维化形成；S1：轻度纤维化；S2：纤维化超过汇管区；S3：桥接纤维化；S4：肝硬化。炎症活动度分级＞G2和肝纤维化分期＞S2，提示肝组织炎症或纤维化程度显著[11，12]。

1.4 统计学方法 应用SPSS 20.0软件进行统计学分析，计数资料以%表示，组间比较采用x2检验。计量资料以（±s）表示，组间比较采用方差分析。采用Logistic回归分析影响肝组织炎症和纤维化的因素，P＜0.05被认为差异具有统计学意义。

表1 各组慢性HBV感染者生化、血清和病毒学指标（%，±s）的比较

与HBV携带者比，①P<0.05；与慢性乙型肝炎比，②P<0.05

例数HBV携带者 150乙型肝炎 150肝硬化 150 TBIL（μmol/L）12.5±4.2 15.6±7.0 98.4±36.8①②ALB（g/L）43.2±2.1 37.5±5.1①32.9±9.2①②ALT（IU/L）25.2±5.1 321±80.3①86.2±23.5①②AST（IU/L）24.1±6.8 235±101.5①106.5±86.7①②HBeAg阳性121（80.7）99（66.0）①41（27.3）①②HBV DNA（×104copies/ml）8.2±0.5 7.2±0.4①5.3±0.7①②

2 结果

2.1 各组慢性HBV感染者生化、血清和病毒学指标的比较 三组生化、血清学和病毒学指标的比较具有统计学差异（P＜0.05，表1）。

2.2 各组血清GP73水平比较 慢性HBV携带者血清GP73水平为（46.5±7.8）ng/ml，慢性乙型肝炎组为（90.2±10.9）ng/ml，乙型肝炎肝硬化组为（231.6±20.1） ng/ml，均显著高于健康人组的（36.7±6.6） ng/ml，差异有统计学意义（P＜0.05），肝硬化患者血清GP73水平也显著高于慢性乙型肝炎或HBV携带者（P＜0.05）。

2.3 不同肝组织炎症分级和纤维化分期的慢性HBV携带者血清GP73水平比较 经肝组织检查，150例慢性HBV携带者肝内炎症活动度分级和纤维化分期情况见表2。肝组织炎症活动度分级和纤维化分期严重的患者血清GP73水平显著升高，与分级或分期轻的人群比，差异有统计学意义（F=16.8，F=19.2，P 均＜0.05）。

2.4 肝组织显著炎症和显著纤维化的危险因素分析 经Logistic回归分析发现，血清GP73水平升高是肝组织显著炎症和纤维化的高危因素（P均＜ 0.05，表3）。

表2 不同炎症分级和纤维化分期的慢性HBV携带者血清GP73(ng/ml，±s)比较

表2 不同炎症分级和纤维化分期的慢性HBV携带者血清GP73(ng/ml，±s)比较

与 G0～G1或 S0～S1组比，①P＜0.05；与 G2或 S2组比，②P＜0.05

例数 GP73 G0～G1 105 45.2±12.8 G2 30 63.8±15.0①G3～G4 15 83.7±20.1①②S0～S1 98 45.1±16.8 S2 30 67.3±16.4③S3～S4 22 72.0±18.4④⑤

表3 肝组织显著炎症和纤维化的危险因素分析

3 讨论

在慢性HBV感染者，血清ALT可表现为正常，但是部分患者可能已经出现了肝脏炎症性损伤，因此血清ALT不能完全反映肝组织炎症和纤维化程度[7，13-15]。GP73是Ⅱ型高尔基体膜蛋白。既往研究发现，血清GP73水平在各种病毒性或非病毒性良性肝脏疾病患者显著升高[5]。Block et al[16]在2005年首次指出GP73与慢性乙型肝炎的肝组织病理学损伤进展密切相关。目前，关于GP73的研究多集中在肝细胞癌，如肝细胞癌患者外周血GP73水平和肝组织GP73表达明显增高，在肝癌的诊断方面有较高的准确性[17]。本研究发现，血清GP73水平与慢性HBV携带者肝组织炎症分级和纤维化分期有关，或可作为预测慢性HBV携带者肝组织炎症和纤维化的潜在标志物。

本研究观察了慢性HBV携带者肝组织炎症和纤维化程度，结果发现，G0～G1患者占70.0%，G2以上占30.0%；S0?S1期患者占65.3%，S2期以上占34.7%。本研究还提示，尽管部份慢性HBV携带者血清ALT水平正常，但是可能已经出现了肝组织炎症损伤和纤维化。慢性乙型肝炎防治指南[18]指出，尽管慢性HBV携带者血清ALT水平正常，也应进行肝穿刺活检，否则将错过抗病毒治疗的时机。但是，在抗病毒治疗前对所有人群进行肝穿刺是不可行的。因此，临床上需要可以反映肝组织炎症损伤的其他生物学标记物，以便筛选高危人群。本研究发现，血清GP73水平与慢性HBV携带者肝组织炎症和纤维化有关，经Logistic回归分析发现，血清GP73水平是预测肝组织炎症和纤维化的独立危险因素。结果表明，血清GP73检测是一个比血清ALT更为敏感的能反映肝组织炎症和纤维化的生物标记物，并可以弥补慢性HBV携带者仅检测血清ALT的不足。我们认为，应对慢性HBV携带者进行肝穿刺活检，早期发现病情，以便及时地给予抗病毒治疗，这样可以避免因血清ALT水平正常而延误了治疗时机。

本研究还发现，随着慢性HBV感染病程的进展，肝组织炎症和纤维化程度加重，血清GP73水平逐渐升高，这可能是一个很值得关注的现象。在150例慢性HBV携带者中，血清GP73水平随着肝组织炎症活动分级和纤维化分期严重而升高，差异有统计学意义。血清GP73水平升高预示着肝组织炎症活动分级和纤维化分期严重。本研究结果与Zheng et al[19]研究一致，该研究小组发现在急慢性肝病患者，血清GP73水平升高与肝组织炎症和纤维化程度有关。在无明显肝组织炎症（≤G1）和纤维化（≤S1）的患者，血清GP73水平较低，但是一旦出现肝组织炎症或纤维化，肝细胞释放GP73蛋白入血增多，导致血清GP73水平升高。既往研究发现，慢性肝炎病毒，特别是HBV感染患者血清GP73水平会显著升高，其升高的程度与肝细胞坏死的严重程度相关[20-22]。

综上所述，血清GP73水平随着慢性HBV携带者肝组织炎症分级和纤维化分期加重而升高。临床上，有部分慢性HBV携带者血清ALT水平在正常范围内，但是肝组织却已经发生了明显的炎症和纤维化，若仅根据血清ALT水平作出判断，将延误抗病毒治疗的时机。本研究结果显示，血清GP73水平似乎比血清ALT能更敏感地反映肝组织炎症和纤维化程度，是否可作为预测慢性HBV携带者肝组织炎症和纤维化的潜在标志物，还需要进一步研究。