伤科解毒颗粒的薄层色谱研究

广西壮族自治区玉林市中西医结合骨科医院药剂科，广西 玉林

伤科解毒颗粒是我院正在研制的院内制剂，由金银花、野菊花、桃仁、红花、延胡索、柴胡等药组成，在我院临床使用多年，用于防治骨折术后感染和下肢静脉血栓疗效确切。方中金银花为君药，清热解毒，可防治术后感染；延胡索具有活血行气止痛之功效，可以有效的缓解术后疼痛，柴胡具有疏散退热，疏肝解郁，升举阳气的功效，协同各药发挥疗效。为了更好地控制制剂的质量，参考《中药药典》(2015版)[1]以及查阅文献[2-6]，制定伤科解毒颗粒中金银花、延胡索、柴胡的专属性薄层色谱鉴别方法。

1 仪器与试药

梅特勒电子分析天平(型号：AB204-S)；JJ1000型电子天平(常熟市双杰测试仪器厂)；800型离心机(上海硕光电子科技有限公司)；KQ-50E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；定量点样毛细管；聚酰胺薄膜(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂)；伤科解毒颗粒样品及相应阴性对照为本院制剂室自制，对照品和对照药材均购自中国药品生物制品鉴定所，金银花对照药材(批号：121060-201608)；绿原酸对照品(批号：110753-201716)；延胡索(元胡)对照药材(批号：120928-201609)；延胡索乙素对照品(批号：110726-201718)；柴胡(北柴胡)对照药材(批号：120992-201509)，其余试剂均为分析纯。

2 方法与试药

2.1 金银花的薄层鉴别 称取四个不同批号伤科解毒颗粒15 g，加石油醚(60～90℃)30 mL，加热回流1 h，弃去石油醚，残渣挥干溶剂，加入甲醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用氯仿萃取2次，每次25 mL，弃去氯仿层，水层用乙酸乙酯萃取2次，每次25 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2 mL溶解，作为供试品。另按相同工艺和比例制备缺金银花的阴性对照样品，取缺金银花的阴性对照样品15 g，同法制成阴性对照品溶液。金银花对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。绿原酸用甲醇制成浓度为1 mg/mL的对照品溶液。吸取上述四种溶液1 μL，点于同一块聚酰胺薄膜上，于36%醋酸溶液中展开，展距约为8～9 cm，取出，晾干，于紫外365 nm下检视，供试品溶液于对照品、对照药材在相同位置显相同颜色的荧光斑点，阴性对照不得在相同位置显相同颜色的荧光斑点。实验结果如图1所示。

2.2 延胡索的薄层鉴别 伤科解毒颗粒15 g，加甲醇50 mL，超声30 min，3500 r/min离心5 min，上清液水浴蒸干，残渣加水20 mL溶解，加入约2 mL稀盐酸调溶液至pH2以下，3500 r/min离心5分钟，上清液用氨试液调节pH值至9以上，用乙酸乙酯提取3次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。取醋延胡索阴性对照颗粒15 g，同法制成醋延胡索阴性对照溶液。取延胡索对照药材1 g同法制成延胡索对照药材溶液。取延胡索乙素对照品，加甲醇制成浓度为0.5 mg/mL的延胡索乙素对照品溶液。吸取上述四种溶液15 μL，点于同一块1%NaOH硅胶G板上，于甲苯-丙酮(9∶2)中展开，展距约为8～9 cm，取出，晾干，喷以新鲜配制的碘化铋钾溶液，热风吹至显色，日光下检视，供试品溶液于对照药材、对照品溶液在相同位置显相同颜色的斑点。阴性对照不得在相同位置显相同颜色的斑点。实验结果如图2所示。

2.3 柴胡的薄层鉴别 伤科解毒颗粒15 g，加沸水50 mL溶解，滤过，滤液加水饱和的正丁醇萃取3次，每次25 mL，用氨试液洗涤两次，每次25 mL，用正丁醇饱和的水洗2次，每次25 mL，正丁醇层水浴蒸干，残渣加甲醇2 mL溶解，作为供试品。取柴胡阴性颗粒15 g，同法制成柴胡阴性溶液。柴胡对照药材2 g，加水100 mL，煎煮1 h，放冷，滤过，滤液同法制成柴胡对照药材溶液。吸取上述三种溶液15 μL，点于同一块硅胶 g板上，于氯仿-甲醇-水(7∶3∶1)10℃下放置5 h以上的下层液中展开，展距约为8～9 cm，取出晾干，喷以2%对二甲基苯甲醛的40%硫酸溶液，热风吹至显色，日光和紫外365 nm下分别检视，都不得少于3个相同颜色的对应斑点。阴性对照不得在相同位置显相同颜色的斑点。实验结果如图3所示。

3 讨论

在金银花的鉴别试验中，比较了甲醇超声、乙酸乙酯萃取的方法，均不能有效分离杂质，绿原酸斑点都有干扰，所以采取了加热回流提取后再萃取纯化，效果较好。比较了①乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)[1]、②乙酸乙酯-甲醇-水(10∶4∶6)10℃以下放置过夜的下层液[9]、③36%醋酸[10]3种展开系统，①拖尾严重；②有边缘效应；③斑点清晰，分离度较好，无阴性干扰。试验还比较了硅胶g板、硅胶h板、聚酰胺薄膜[11]的展开效果，聚酰胺薄膜点样量少，斑点分离清晰，展开效果较好。绿原酸对照品色谱中有2个斑点，与本课题相关试验中的高效液相色谱行为一致，可能是绿原酸极性较大，易分解的缘故[12]。

延胡索的鉴别按《中国药典》[1]中的方法进行鉴别时，斑点较淡，不易观察。本试验调整提取方法，中间用酸调过滤后再加氨试液进行萃取[13]，以去除杂质干扰。比较1%氢氧化钠的硅胶g板、普通硅胶g板氨蒸汽饱和展开、1%氢氧化钠的硅胶g板氨蒸汽饱和展开，以1%氢氧化钠的硅胶g板展开效果最佳。显色方法比较了放置碘缸和碘化铋钾试液[14]，放置碘缸的显色方法斑点不清晰，喷以新鲜配置的碘化铋钾试液后斑点显色迅速，清晰。

柴胡在《中国药典》中的提取方法较为简单，但是笔者用此方法制备供试液进行鉴别供试品呈一条光带，斑点没有分离出来，于是对提取方法进行纯化精制[15]。虽然方法繁复，但是供试品色谱斑点清晰，适合于复方制剂中柴胡皂苷的检出。本试验也用乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)、氯仿-甲醇-水(6.5∶3.5∶1)10℃以下放置的下层液为展开剂[14]，效果均不理想，斑点分离不够清晰。试验也比较了60℃烘干、热风吹干、105℃烘干3种三色方法，发现60℃烘干显色速度较慢，时间不易控制，105℃烘干易糊化，热风吹干显色速度快，易于观察和控制。

伤科解毒颗粒的辅料为糖粉和糊精，所以用水溶解的过程中，糖的干扰会很大，所以去除糖分干扰，纯化供试品溶液成为提取的关键。本试验的提取方法步骤虽较多较繁杂，但是比较适合复方制剂中药材的鉴别。