不锈钢网对脐带间充质干细胞贴壁及增殖数量影响的实验研究

高健伟，郭红燕，吕昕刚

自从人脐带间充质干细胞出现以来，逐渐成为人们的研究热点；但干细胞的培养扩增还存在较多问题，很多因素都可以导致原代干细胞体外培养失败（如选择培养基、血清、脐带质量、无菌情况、技术操作等等情况），即使成功培养MSCs也会出现生长不良，数量少等情况，影响实验效果及结果。笔者采用事先预制好的不锈钢丝网置入贴壁后的脐带组织中进行原代培养，观察细胞贴壁的效果和细胞生长情况以及形态变化，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 不锈钢网（市售，型号304，规格1 mm×1 mm×1 mm），DMEM/F12（HyClone）（图 1），青霉素和链霉素 100×（Solabio），15%FBS（Gibco），培养皿（美国康宁），倒置显微镜（100×），荧光倒置显微镜（100×），细胞计数板。

图 1 预制不锈钢网

1.2 培养皿孔数和不锈钢网的处理 全部采用6孔培养板，所有培养板只能用同一种培养基，共2板，1孔为一份标本，共12份标本。不锈钢网常规洗洁精清洗3遍，放入数控超声仪内超声处理30 min，清水再冲洗3～5遍，最后纯水冲洗3遍烘干，高压无菌灭菌锅消毒备用。

1.3 培养观察时间 时间观察点分别是7 d，10 d，15 d，20 d，25 d，记录细胞游出数量情况和细胞形态的变化情况。

1.4 脐带采集和培养 人脐带间充质干细胞原代培养采用组织块贴壁法进行，分为：A组为正常培养组，B组为置入不锈钢网组。选用足月、健康产妇的新鲜、无菌的新生儿脐带长约15 cm，用无菌4℃恒温盒储存运输，即刻消毒，用PBS（含1∶1000的青霉素和链霉素）反复冲洗表面血迹和血管内血迹，清洗彻底干净，随后用组织剪剪取干净、清亮、饱满部分的脐带，每一段长约1 cm，挑选取用12段用PBS再次反复冲洗。……