葡萄酒中甜蜜素含量的分析研究

李 燕，顾志斌，鞠忠杰

（烟台市食品药品检验检测中心，山东烟台264003）

近年来，在国家对食品安全严格把控，消费者对产品质量的关注日益增加的大背景下，我国的葡萄酒质量也得到显著提升，在国家公布的抽查结果中葡萄酒的质量合格率很高。但是，我国标准体系、方法更新速度快，也给葡萄酒生产带来了不小的挑战，使得企业不得不更多的关注葡萄酒的生产控制和质量把关。

GB5009.97—2016《食品安全国家标准食品中环己基氨基磺酸钠的测定》于2016年9月20日实施以后，检测机构对葡萄酒中甜蜜素的测定由原来的气相色谱法改为液相色谱-串联质谱法[1]，两种方法的灵敏度有很大差别，新方法较原方法的检出限[2]低了300多倍，这意味着原来未检测出甜蜜素的葡萄酒，在新标准实施后，有可能会检测出甜蜜素，从而造成产品不合格。为了了解新方法测定市售葡萄酒中甜蜜素的含量情况并对其进行原因分析，本文对现有液相色谱-串联质谱法进行改进和优化，并采购了30个市售葡萄酒样品进行测试，对结果进行分析和研究。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

样品：30个干型葡萄酒，购于超市。

甲酸，色谱纯；甜蜜素标准品，北京谭墨质检科技有限公司，纯度99.5%；实验室用水，二级水。

标准溶液配制：用10%空白样品的水溶液，配制成系列浓度为2μg/L、5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L的甜蜜素标准工作曲线。

仪器设备：LC-MS/MS AB5500，美国AB公司。

1.2 实验方法

1.2.1 样品前处理

取葡萄酒5.00 mL于50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，定容。0.2 μm滤膜过滤，上机。

1.2.2 LC-MS/MS条件

色谱柱：ZPRBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×100 mm，3.5µm)；流动相：甲醇+0.1%甲酸水溶液=30+70。

流速：0.2 mL/min；进样量：10µL；柱温：35℃。

2 结果与分析

2.1 条件优化

2.1.1 标准工作曲线配制方式的选择

由于葡萄酒样品中含有一定的有机物，容易对目标物造成较大干扰，从而影响检测结果的准确性。利用与样品基质相近的阴性样品水溶液（浓度与测试样品保持一致）配制标准工作溶液，能够有效降低基质干扰。利用纯水配制的工作曲线测试样品，回收率为60%～88%；而用阴性样品水溶液配制的工作曲线测试样品，回收率为80%～106%。

2.1.2 ICP-MS/MS质谱条件的优化

通过质谱条件的优化，使目标物的响应达到最佳。分析物质量及分析条件见表1。

表1 分析物质量及分析条件

2.2 方法线性及检出限

利用优化的质谱条件，对标准系列溶液进行分析，做线性回归并绘制标准曲线，对应的校正曲线见图1，定性、定量离子色谱图见图2，线性相关系数为0.9997，在0～30µg/L范围内线性良好。

对10%阴性样品水溶液进行测试，以3倍信噪比所对应的样品质量浓度为方法检出限，计算结果为0.02 mg/kg。

图1 甜蜜素标准曲线图

图2 定量、定性离子色谱图

2.3 精密度和回收率

吸取5.00 mL阴性样品作为空白样品于50 mL容量瓶中，同时做3个浓度梯度的加标试验，即10µg/L、30µg/L、100µg/L。同时做样品空白及6个平行加标试验。计算方法的加标回收率及相对标准偏差，结果见表2。

表2 方法的回收率及精密度

2.4 样品分析

对市售的30个国产干型葡萄酒样品进行了分析测试。从测试结果看，检出甜蜜素的样品有3个，含量分别是0.012 mg/L、0.18 mg/L和0.38 mg/L。其余样品的测定值均低于方法检出限。

从检出的样品分布看，市售的葡萄酒样品绝大部分未检出甜蜜素，但在检出的样品中甚至有规模较大的企业生产且市场销量较高的产品；从含量范围看，虽然有3个样品经液相色谱-串联质谱法检测为阳性，但其浓度远低于气相色谱法的检出限[3-4]，且并不是人为添加的水平。以上说明这些产品的生产控制仍停留在原来的标准，并没有因检测方法的变更而加强对产品质量控制，造成生产过程中的污染或带入。经调查、了解和分析，产品中污染甜蜜素原因，一方面是生产线和生产工具与配制酒或其他酒混用，将微量甜蜜素带入葡萄酒中；另一方面，在葡萄种植和采摘过程中，生产工具的混用也可能造成最终产品的污染。

3 结论

本实验对LC-MS/MS法测定葡萄酒中甜蜜素进行了方法优化，方法检出限显著低于现行标准方法，且有效降低了基体干扰，线性范围在0～100µg/L良好，回收率91%～102%，能够满足样品测定的要求，样品平行测定RSD小于3%。同时，利用本方法对30个葡萄酒样品进行的分析测试结果，能够为企业生产的质量控制，尤其是添加剂的监控提供可靠数据支撑。同时找出可能造成污染的原因，为企业进一步加强生产和质量管理提供参考。