老龄大鼠听功能下降与线粒体DNA4834bp缺失突变的关系

黄海林 刘俊⋆

老年性耳聋是老年人中发生率较高的慢性疾病，是衰老在听觉器官的表现。研究表明，衰老与线粒体功能紊乱密切相关，而线粒体功能紊乱是线粒体DNA突变引起的。Bai等［1］报道mtDNA4977缺失与老年性耳聋存在可能相关性。Fischel-Ghodsian等［2］检测5例老年性耳聋患者膜迷路和螺旋神经节中mtDNA编码的细胞色素氧化酶Ⅱ基因，发现老年性耳聋患者mtDNA突变率高于老年对照组，但突变发生的部位和数量均存在较大个体差异。常见的线粒体DNA缺失突变片段有 13162bp，10422bp，7663bp，7436bp，4989bp，4977bp，其中人mtDNA4977bp（对应大鼠4834bp）是mtDNA中最为常见突变类型［3］。2015年10月至2016年3月作者通过实验研究，探讨老年性聋发生的可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级SD大鼠20只，其中24个月龄SD大鼠10只，平均（647.83±10.35）g；3个月龄SD大鼠10只，平均（210.78±5.62）g，所有动物均无噪声暴露史及其它药物使用史，且无中耳炎，动物由华中科技大学同济医学院提供。

1.2 方法 （1）分组：20只SD大鼠经听性脑干反应（ABR）检测，排除中耳炎后按年龄分2组，各10只，24个月龄为观察组；3个月龄为对照组。（2）检测大鼠听性脑干反应（ABR）反应阈：分别对对照组和观察组大鼠进行ABR反应阈测定（测定方法参照孔维佳建立方法［4］）。测试前两组大鼠用10%水合氯醛按照0.4ml/kg腹腔内注射麻醉，使用GSI Audera脑干诱发电位仪测试。（3）蜗神经核及内耳组织mtDNA提取：两组动物ABR测试结束后立即麻醉断头处死，首先提取脑蜗神经核：于中线处剪开颅骨，将脑组织轻轻从颅骨中取出，根据蜗神经核［5］定位提取脑蜗神经核，置入匀浆器中，加入2ml匀浆液（pH7.4，0.01mol/L Tris-HCI，0.1mmol/L，0.01mol/L蔗糖）匀浆至无明显组织块存在（冰浴操作）。……