时间分辨免疫荧光法检测结核感染T细胞释放γ-干扰素的方法建立及初步临床应用*

谭玉华，朱应竹，江 燚，陶佳俊，吴能伟

(广州市丰华生物工程有限公司体外诊断试剂研发中心，广州 510730)

全球结核病2016年度报告发布，近年全球结核病患者数量仍呈上升趋势，我国结核发病人数再居全球第三位，全球结核病疫情仍然处于较高状态，控制形势依然严峻[1]。结核病依然是十大致死原因之一，肺结核发病率和死亡率均居第二位[2]。世界卫生组织也再次强调了“终止结核病策略”，但近年全球结核病的发病率仅以每年2%的缓慢速度下降。结核分枝杆菌(mycobacterium tuberclebacilosis，TB)感染的诊断一直是临床上的一个难点，因此急需新的、革命性的技术应用于结核病防控。γ-干扰素释放试验(interferon gamma release assays，IGRAs)作为结核感染筛查最新方法，已在欧美国家得到全面推广，并写入了诊疗指南，推荐替代结核菌素皮肤试验作为结核感染检测的实验室检测方法[3]。时间分辨免疫荧光法(time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA)是用三价稀土离子及其鳌合物为示踪剂的超灵敏度检测技术，已成为现代生物医学研究和临床超微量检验中最有发展前景的分析手段之一。笔者基于IGRAs和TRFIA原理，建立了一种TRFIA检测结核感染T细胞释放γ-干扰素(interferon gamma，IFN-γ)的方法，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验样本 用肝素钠抗凝管采集了297例患者的全血样本，其中175例为已按中华医学会结核病学分会制定的《肺结核诊断和治疗指南》[4]确诊的结核病患者，包括73例结核分枝杆菌阳性肺结核患者，77例结核分枝杆菌阴性肺结核患者和25例肺外结核患者；另52例为呼吸道疾病以外的非结核患者组，70例为非结核呼吸道疾病(含肺癌)患者。……