沙棘粕醇提物的定性定量分析及其对衰老小鼠肝脏抗氧化指标的影响

张佳婵，王昌涛,，赵 丹，王成涛,2，孙宝国,2

（1.北京食品营养与人类健康高精尖创新中心，北京工商大学，北京 100048；2.北京工商大学食品学院，食品添加剂与配料北京高校工程研究中心，北京 100048）

沙棘（Hippophae rhamnoides L.）为胡颓子科（Elaeagnaceae）酸刺属的灌木或小乔木，是西北地区特有的高原特色水果。沙棘不仅可以当水果食用，其籽还可以榨油。沙棘粕是沙棘籽经过脱油处理后的副产物，常被丢弃或当作饲料使用。但是研究证实，沙棘粕中仍然富含部分油脂、肽类、糖类、酚类、黄酮、萜类以及原花青素等活性物质[1-4]，具有显著的抗炎、抗肿瘤、抗衰老、抗氧化功能，对心脑血管也有显著保护功效[5-7]。

目前很多现代分析技术应用于植物化学物的分析和检测，其中超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱（ultra-performance liquid chromatography coupled with quadruple time-of-f l ight tandem mass spectrometry，UPLCQTOF-MS/MS）是复杂样品化学组成分析及鉴定的重要工具，在缺少标准品的情况下，仍然可以通过二级质谱进一步轰击一级碎片，通过仪器分析软件计算可能的碎片分子式，具有高灵敏度、高分辨率、高精密度等优点[8-9]。超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱（ultra performance liquid chromatography coupled with triple quadruple mass spectrometry，UPLC-QQQ-MS）技术的多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）是目前最受关注的定量方法，该方法灵敏度高、准确度高，可有效避免假阳性，已成为复杂物质痕量分析的主流分析技术[10]。

本研究前期已对沙棘粕醇提物（sea buckthorn seed extract，SBSE）进行一系列的定量分析和功效评价[11-12]，但是并未明确以及定量主要的化学成分，并且其功效评价也仅限于化学水平以及细胞水平，未涉及动物实验研究。因此，本实验首先采用UPLC-QTOF-MS/MS技术鉴定SBSE主要化学成分，通过UPLC-QQQ-MS技术对SBSE的部分化学成分进行定量分析；其次，建立以D-半乳糖诱导的衰老动物模型，评价SBSE灌胃小鼠的肝脏组织总抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSHPx）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和过氧化氢酶（catalase，CAT）活性以及丙二醛（malondialdehyde，MDA）和脂褐素（lipofuscin，LP）含量。该研究将为SBSE的开发利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

沙棘粕来源于青海康普生物科技股份有限公司；沙棘粕醇提物的制备及纯化方法见参照文献[11-12]。SPF级ICR雄性小鼠，平均体质量（23±3）g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。

乙腈（色谱纯） 德国Merck公司；甲酸（色谱纯）、D-半乳糖（分析纯） 美国Sigma公司；标准品：没食子儿茶素（1#）、原花青素B1（2#）、表没食子儿茶素（3#）、原花青素B2（4#）、儿茶素（5#）、表儿茶素（6#）、表儿茶素没食子酸酯（7#）、儿茶素没食子酸酯（8#）、白藜芦醇（9#）、杨梅素（10#）、槲皮素（11#）、山柰酚（12#）、异鼠李素（13#）、山柰素（14#）、芦丁（15#）、异鼠李素-3-O-芸香糖苷（16#）、槲皮素-3-O-葡萄糖苷（17#），异鼠李素-3-O-葡萄糖苷（18#）、异鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷（19#）、槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷（20#）、山柰酚-3-O-芸香糖苷（21#） 上海源叶科技有限公司；生理盐水、无水乙醇（分析纯） 北京化工厂；考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒、GSH-Px检测试剂盒、SOD检测试剂盒、CAT检测试剂盒、MDA检测试剂盒、T-AOC检测试剂盒 碧云天生物技术有限公司；超纯水由实验室自制。

1.2 仪器与设备

Acquity UPLC仪、Xevo G2 Q-TOF高分辨四极杆飞行时间质谱仪 美国Waters公司；UPLC-QQQ-MS仪美国Agilent公司；Milli-Q超纯水仪 美国Millipore公司；CAP225D分析天平（十万分之一） 德国Sartorius公司；DSHZ-300恒温水浴振荡器 江苏省太仓市实验设备厂；SPx-250BF-2生化培养箱 上海福玛实验设备有限公司；FC Multiskan酶标仪 赛默飞世尔（上海）仪器有限公司；Anke 3-30K台式高速冷冻离心机 德国Sigma公司。

1.3 方法

1.3.1 UPLC-QTOF-MS/MS分析条件

UPLC条件：二极管阵列检测器；C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；洗脱溶剂：流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B为乙腈；流速0.3 mL/min；柱温30 ℃；进样量2.00 μL；梯度洗脱程序：0～1 min，100% A；1～4 min，100%～40% A；4～7 min，40%～0% A；7～12 min，0% A；12～12.10 min，0%～100% A。

MS条件：ES mode电喷雾离子源，负离子模式；质量扫描范围m/z 50～2 000；毛细管电压2.3 kV；碰撞气N2；离子源温度120 ℃；干燥器温度400 ℃；锥孔气流量20.0 L/h；脱溶剂气流量800.0 L/h；碰撞电压6.0 kV；飞行管电压9.0 kV；母离子碰撞能量10～30 eV。

1.3.2 UPLC-QQQ-MS分析条件

UPLC条件：二极管阵列检测器；C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；洗脱溶剂：流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B为乙腈；流速0.3 mL/min；柱温30 ℃；进样量2.00 μL。梯度洗脱程序：0～1 min，100% A；1～4 min，100%～40% A；4～7 min，40%～0% A；7～12 min，0% A；12～12.10 min，0%～100% A。

MS条件：ES mode电喷雾离子源，负离子模式；毛细管电压2.5 kV；锥孔电压50 V，脱溶剂气流量（N2）800.0 L/h；脱溶剂温度200 ℃；锥孔气流量（N2）50.0 L/h；离子源温度150 ℃。

1.3.3 标准溶液制备

精密称量1#～21#标准品各1.000 mg，分别置于10 mL容量瓶中，甲醇溶解，定容，配制成100 μg/mL的标准储备液。因所选标准品中含有同分异构体，因此配制成3 个混合标准溶液。分组如下：1#、2#、5#、8#、16#、17#、18#、19#、20#及21#为混合标准溶液1，质量浓度为25 μg/mL；3#、4#、6#、7#、15#、16#、17#、19#、20#及21#为混合标准溶液2，质量浓度为10 μg/mL；9#、10#、11#、12#、13#、14#、17#、19#、20#及21#为混合标准溶液3，质量浓度为5 μg/mL。据实验需要将混合标准溶液逐级稀释成系列质量浓度，4 ℃保存备用。

1.3.4 样品溶液的制备

精确称取SBSE 0.050 g，加甲醇25 mL溶解，过0.45 μm滤膜，得到2.00 mg/mL的样品溶液。

1.3.5 沙棘籽粕化学成分数据库的建立

查阅国内外沙棘籽、沙棘叶、沙棘枝等植物部位的化学成分研究相关文献[5-7,13-19]，收集可能与沙棘粕相关的各类化学成分，并通过Molecular Mass Calculator计算精确相对分子质量，建立包括化合物名称、分子式、m/z的醇溶性沙棘化学成分数据库。

1.3.6 主要化学成分的鉴定

SBSE样品以及混合标准溶液1、2、3在1.3.1节条件下，分析得到SBSE以及混合标准溶液1、2、3的HPLCQTOF-MS/MS总离子流图。采用MassLynx 4.1软件对原始数据进行分析。首先，对比1.3.5节沙棘籽粕化学成分数据库，搜索分子离子峰，通过Single Mass Analysis工具在10 μg/mL的质量浓度偏差范围内计算其精确分子式，与相应化合物进行比对、鉴定；其次，选择合适分子离子峰进行碰撞诱导解离，进行二级质谱的裂解，获得化合物相应的碎片离子，根据离子的裂解情况并结合标准品和文献报道进一步比对推测。

1.3.7 UPLC-QQQ-MS定量分析主要化学成分

采用MRM定量模式，对14 种分析物的MS分析条件进行优化，考虑因素包括母离子和子离子、锥孔电压和碰撞电压。分别配制14 种分析物的单标工作液，选择负离子模式运行全扫描的方法测定单标工作液，选择丰度较高的特征离子作为MRM模式的母离子，采用子离子扫描模式，根据母离子在不同碰撞电压条件下的全扫描图，选择丰度较强的特征碎片离子作为MRM模式的子离子，优化碰撞电压和锥孔电压。将混合标准溶液进行倍比稀释，配制成不同质量浓度的混合标准溶液，依照色谱条件测定峰面积，以峰面积（Y）和分析物质量浓度（X）作线性回归，求回归方程及线性相关系数r。进一步稀释混合标准溶液，获得近似信噪比分别为3和10的质量浓度，作为检出限（limit of detection，LOD）和定量限（limit of quantity，LOQ）。

1.3.8 方法验证

精密度实验：精密吸取3 种混合标准溶液，1 d内连续重复6 次，以及连续测定6 d，分别记录分析物的峰面积，根据标准曲线计算质量浓度，获得仪器日内精密度和日间精密度，用相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）表示。

稳定性实验：分别间隔0、2、4、8、12 h和24 h测定样品中分析物的含量，计算精密度，用RSD表示。

重复性实验：按照1.3.4节方法，配制6 份同批次制备的SBSE样品待测液，分别测定分析物的含量，计算精密度，用RSD表示。

回收率实验：分别向SBSE样品待测液中添加一定量的目标分析物，平行6 次，计算回收率。

表1 SBSE各化学成分的鉴定分析Table1 Qualitative analysis of chemical constituents in SBSE

1.3.9 实验动物分组及衰老模型的建立

SPF级ICR雄性小鼠50 只适应性饲养1周，随机分成5 组，每组10 只，分别为：对照组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组。除对照组外，其他各组腹腔注射10% D-半乳糖溶液，剂量为100 mg/（kg·d），以体质量计，下同；对照组小鼠注射相同剂量生理盐水；低、中、高剂量组小鼠分别以100、300、600 mg/（kg·d）的SBSE灌胃。对照组和模型组灌胃等体积生理盐水。持续处理42 d。灌胃期间自由饮水和进食，饲养环境温度22～25 ℃，相对湿度50%～60%，每隔3 d更换一次垫料，光照充足。

1.3.10 小鼠样本收集

实验结束时，小鼠处死前12 h禁食，颈椎脱臼法处死小鼠，取肝脏组织以1∶9（g/mL）的比例加入预冷的生理盐水，冰浴条件下匀浆制备10%匀浆液，3 000 r/min、4 ℃离心15 min，取上清液用于测定组织生化指标。

1.3.11 小鼠肝脏生化指标的测定

肝脏组织匀浆中SOD、GSH-Px、CAT、T-AOC活性和氧化产物LP和MDA含量的测定均按照试剂盒说明书的方法进行。T-AOC活性以每克组织毫摩尔Trolox计（mmol/g）；LP含量以每毫克蛋白皮克计（pg/mg）；MDA含量以每毫克蛋白微摩尔计（μmol/mg）。

1.4 统计学分析

利用SPSS 19.0数据处理软件进行统计学处理，组间比较采用单因素ANOVA分析，两两比较采用t检验，以P值小于0.05为差异显著，说明具有统计学意义，所得结果以表示。

2 结果与分析

2.1 UPLC-QTOF-MS/MS化学成分分析

通过比对分析，共鉴定24 种化合物，如图1、表1、图2所示。其中，与标准品比对共鉴定出14 种化合物，其化学结构及二级质谱碎片见图3。

图1 SBSE的离子色谱图Fig.1 Base peak ion chromatograms of SBSE analyzed by UPLC-QTOF-MS/MS

图2 混合标准溶液的离子色谱图Fig.2 Base peak ion chromatograms of mixed standard solution by UPLC-QTOF-MS/MS

图3 标准品结构及二级特征质谱信息Fig.3 Structures and MS2 patterns of standard compounds

2.1.1 有机酸类

如图1所示，峰1（0.95 min）减去一个H后，m/z为191.055 6[M－H]－，二级碎片中存在m/z为127.042 1[M－2H2O－CO－H]－、111.048 5[M－2H2O－CO2－H]－的碎片峰，与参考文献[20-21]一致，鉴定为奎尼酸。

峰17（7.78 min）m/z为369.302 0[C13H22O12－H]－，二级碎片存在191.055 1[C7H12O6－H]－，推测为奎尼酸残基，存在碎片147.065 7，推测为戊碳糖残基，存在319.139 0，推测为[C12H21O10－H]－，一级质谱碎片369.302 0可能为[M+HCOOH－H]－，二级碎片173.081 5推测为C12H21O10脱去C4H7O6和一个H后的碎片，推测峰17为奎尼酸戊糖苷。

峰3（3.65 min）减去一个H后，m/z为153.019 0[M－H]－，二级碎片中存在m/z为109.028 8[M－CO2－H]－碎片峰，与参考文献[8]比对，鉴定为原儿茶酸。峰16（7.67 min）m/z为353.087 2[M－H]－，二级碎片存在163.038 9[M－3CH2－4CO－2H2O－H]－、191.055 3[M－C9H6O3－H]－的碎片峰，鉴定为绿原酸[8]。

峰2 1（8.2 8 m i n）脱去一个H后，m/z为279.268 8[M－H]－，二级碎片离子147.053 9推测为桂皮酸残基，133.052 2推测为戊碳糖脱去OH后的残基，推测峰21为桂皮酰戊糖苷。峰23（8.49 min）分子离子峰m/z为281.102 0[M－H]－，二级碎片离子149.060 4与峰21二级碎片147.053 9相差2，推测峰23为二氢桂皮酸残基，133.047 3为戊碳糖脱去OH后的残基，推测峰23为二氢桂皮酰戊糖苷。

2.1.2 原花青素类

如图1所示，峰2（3.25 min）和峰4（3.62 min）的分子离子峰m/z为305.064 8[M－H]－和305.065 2[MH]－，通过与标准品比对，峰2为没食子儿茶素，峰4为表没食子儿茶素。峰5（3.70 min）分子离子峰m/z为289.070 3[M－H]－，与标准品比对，保留时间（3.70 min）与碎片峰（151.037 6、271.062 2、109.030 1）一致，为儿茶素，可能质谱条件的差异，参考文献中该类物质的碎片有差异[9,21-25]。

2.1.3 槲皮素及其衍生物

如图1所示，峰10（5.20 min）m/z为301.034 0，与标准品槲皮素的保留时间、一级碎片和二级碎片一致，并且碎片信息与参考文献[21]报道一致，因此鉴定为槲皮素。峰8（4.98 min）减去一个H后，m/z为609.145 4[MH]－，二级碎片离子有301.035 2、163.061 9、307.102 8和145.050 8，通过与标准品比对，推测峰8为芦丁，又名槲皮素-3-O-芸香糖苷。峰15（7.20 min）分子离子峰为463.086 6[M－H]－，二级碎片离子有283.021 1[M－2CO2－2H2O－4CH2－H]－、109.030 0[M－9CO－H2O－6CH2－H]－、301.040 1[M－2CO2－H2O－4CH2－H]－，与标准品比对确定峰15为槲皮素-3-O-葡萄糖苷。峰22（8.41 min）的保留时间、分子离子峰以及碎片离子与标准品槲皮素-3-O-葡萄糖苷-7-O-鼠李糖苷一致，因此鉴定为该化合物。峰19（8.00 min）m/z为609.144 9[M－H]－，二级碎片有301.043 1[M－2CO2－H2O－4CH2－H]－，推断为槲皮素衍生物，此外，二级碎片存在463.092 4，与一级碎片离子相差146.052 5，推断含戊碳糖残基，碎片163.060 9为脱落下的己碳糖碎片，碎片308.050 4为芸香糖残基，推测峰19为槲皮素-芸香糖苷异构体，因保留时间不同于芦丁，又因槲皮素3-O-糖苷键与7-O-糖苷键最为活跃，判断峰19为槲皮素-7-O-芸香糖苷。

2.1.4 山柰酚及其衍生物

峰12（5.54 min）m/z为285.038 8，二级碎片有135.007 9、243.029 9、109.029 0，与标准品比对后鉴定为山柰酚。峰6、11、14和24的二级碎片均具有285.0的碎片离子峰，软件分析化学式为[C15H9O6]－，推测为山柰酚衍生物。峰6（4.57 min）减去一个H后，m/z为593.150 3[M－H]－，软件分析推算其分子式为[C27H29O15]－，二级质谱产生碎片315.050 7[MC16H11O7]－、4 3 1.0 9 6 8[M－C6H10O5－H]－、151.060 9[C5H11O5]－，与文献[26]比对，推测峰6为山柰酚-鼠李糖-葡萄糖苷。

峰11（5.33 min）一级碎片m/z为431.096 9[MH]－，二级碎片离子山柰酚残基285.038 9[C15H9O6]－，经计算与一级碎片相差146.058 0，推断碎片为鼠李糖残基，推断峰11为山柰酚-鼠李糖苷。

峰14（6.82 min）分子离子峰m/z为447.092 2[MH]－，推测分子式为[C21H20O11－H]－，二级碎片有4 2 9.0 2 5 2 [M－H2O－H]－，己碳糖残基163.055 7[C6H11O5]－，推测峰14为山柰酚-己糖苷。

峰24（8.76 min）m/z为593.151 2[M－H]－，二级碎片离子447.093 3为脱去鼠李糖苷后的碎片峰，经过与标准品比对，确定峰24为山柰酚-3-O-芸香糖苷。

2.1.5 异鼠李素及其衍生物

峰13（5.63 min）分子离子峰为315.049 3，二级碎片有299.016 4、135.008 5、151.003 5、315.049 5，与标准品比对后鉴定为异鼠李素。峰9（5.10 min）分子离子峰为623.155 8[M－H]－，碎片离子299.019 4[M－Rut－H]－和477.102 2[M－Rha－H]－为分别脱去一个芸香糖残基和一个鼠李糖残基后的碎片离子，179.056 5为异鼠李素的C环碎片，与标准品比对为异鼠李素-3-O-芸香糖苷。峰18（7.82 min）m/z为479.083 0[M－H]－，二级碎片离子有315.050 6、179.051 7、299.019 9、149.026 9，与标准品比对确定为异鼠李素-3-O-葡萄糖苷。峰20（8.07 min）m/z为623.161 1[M－H]－，二级碎片离子有461.109 7、477.103 8、315.050 1，与标准品比对，鉴定为异鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷。

2.1.6 杨梅素

峰7（4.85 min）分子离子峰为317.029 6，二级碎片有151.001 9（C环逆Diels-Alder裂解产生）、299.018 7[M－H2O－H]－、109.030 9，与标准品比对后确认为杨梅素[23]。

2.2 UPLC-QQQ-MS化学成分定量分析

表2 14 种分析物的质谱测定条件Table2 Mass spectrometric parameters of 14 compounds

表3 14 种分析物的线性回归方程Table3 Linear regression curves for 14 compounds

通过查阅文献以及实验摸索，确定14 种待测物质的质谱参数，结果见表2。采用MRM模式，分别检测了一系列质量浓度的标准物质，进行标准曲线的绘制，并对线性范围、r、LOQ、LOD、精密度以及回收率进行测定，结果分别见表3～5。依照检测方法进行样品的定量分析结果见表6。

表4 14 种分析物的精密度结果（n=6）Table4 Precision for replication determination of 14 constituents (n= 6)

由表4可知，1 4 种分析物的日内精密度（0.52%～1.95%）和日间精密度（0.43%～3.12%）较低，表明仪器精密度良好；重复性RSD为0.35%～2.21%，表明方法的重复性良好；稳定性RSD为0.75%～2.94%，表明14 种分析物稳定性好。由表5可知，14 种分析物的回收率为97.18%～101.22%，RSD为0.15%～1.88%。

表5 14 种分析物的回收率结果（n=6）Table5 Recoveries of 14 compounds from spiked sample (n= 6)

通过对SBSE进行定量测定发现，山柰酚-3-O-芸香糖苷在所考察14 种分析物中比例最大，其次为槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷，槲皮素-3-O-葡萄糖苷位居第3。通过归类计算，山柰酚及其衍生物所占比例最大（（667.94±5.61）μg/mL），其次为槲皮素及其衍生物（（204.01±0.04）μg/mL），原花青素类物质仅为（33.97±0.49）μg/mL。Arimboor等[15]也分析了沙棘籽中具有抗氧化性质的糖苷类物质，发现槲皮素-3-O-芸香糖苷最多，与本结果不符，可能原因是原料产地以及提取方式的差异所造成。

表6 SBSE中14 种成分含量（n=3）Table6 Contents of 14 components in SBSE (n= 3)

2.3 SBSE对小鼠肝脏组织T-AOC、LP和MDA水平的影响

D-半乳糖的连续注射会破坏小鼠机体的抗氧化防御系统[27]，使细胞内糖代谢紊乱，机体积累的大量自由基会攻击蛋白质、DNA等生物大分子，引发氧化反应产生大量的LP、MDA等，导致机体衰老[28-29]。T-AOC、LP和MDA水平是公认的评价机体衰老的标志[30]。

图4 小鼠肝脏组织中T-AOC（A）、LP（B）和MDA（C）水平Fig.4 Levels of T-AOC (A), LP (B) and MDA (C) in liver of rats

由图4可知，D-半乳糖诱导的模型组小鼠T-AOC显著低于对照组（P＜0.05），LP和MDA水平显著高于对照组（LP，P＜0.05和MDA，P＜0.01），衰老模型建立成功；经SBSE灌胃一段时间后，低剂量组小鼠的T-AOC水平极显著高于模型组（P＜0.01），中、高剂量组小鼠的T-AOC水平与模型组无显著性差异；SBSE处理小鼠后，LP和MDA水平均极显著低于模型组（P＜0.01）。该结果表明，适当剂量SBSE的摄入有助于提高小鼠肝脏组织T-AOC，这与SBSE含有丰富的抗氧化类物质是密不可分的。

2.4 SBSE对小鼠肝脏组织抗氧化酶活性的影响

机体通过自身的氧化还原系统应对外界刺激导致的氧化应激失衡[31-32]。SOD、GSH-Px和CAT的活性直接反映了机体清除自由基的能力[28,33]。如表7所示，模型组小鼠肝脏组织中SOD、GSH-Px和CAT水平均极显著降低（P＜0.01），该结果再一次表明D-半乳糖诱导建立衰老模型的方法是可行的；衰老小鼠经过一段时间SBSE的灌胃，低、中、高剂量组小鼠的SOD、GSH-Px和CAT水平均高于模型组小鼠，且具有显著性差异（P＜0.05），这同样与SBSE富含的高抗氧化物质息息相关。

表 7 小鼠肝脏组织中SOD、GSH-Px和CAT水平Table7 Levels of SOD, GSH-Px and CAT in liver of rats

3 结 论

本实验首先进行SBSE的定性和定量表征。通过与标准品比对以及文献分析，SBSE共鉴定出24 种化合物。其次，建立其中14 种化学分析物的定量方法，并对仪器、样品和方法进行精密度、稳定性以及重复性的测定，结果表明仪器精密度、样品的稳定性以及方法的重复性均较好。根据定量结果排序，14 种分析物中，位居前列的为山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷和槲皮素-3-O-葡萄糖苷。通过归类计算，山柰酚及其衍生物所占比例最大（（667.94±5.61）μg/mL），其次为槲皮素及其衍生物（（204.01±0.04）μg/mL），原花青素类物质仅为（33.97±0.49）μg/mL。

本实验选择D-半乳糖为诱导剂，通过长期注射，使小鼠机体氧化还原系统紊乱[34-35]，肝脏各项指标结果显示，模型组小鼠肝脏组织T-AOC显著低于对照组（P＜0.05），LP和MDA水平显著高于对照组（P＜0.05），其抗氧化酶活力SOD、GSH-Px和CAT水平均极显著降低，表明D-半乳糖造模成功；SBSE灌胃42 d后，低剂量组小鼠显示具有提高肝脏抗氧化水平的作用，3 种SBSE剂量下，LP和MDA水平均极显著低于模型组（P＜0.01），SOD、GSH-Px和CAT水平均显著高于模型组（P＜0.05）。