莫西沙星侧链的残留溶剂测定

聂忠莉，李婉玉，王晓玲，赵玉玲，张 勇，萧茂玲

(1.成都大学 药学与生物工程学院，四川 成都 610106； 2.成都克莱蒙医药科技有限公司，四川 成都 610041)

0 引 言

盐酸莫西沙星是由拜耳公司研制的第四代氟喹诺酮类超广谱抗生素，它保留了第三代抗革兰阴性菌的活性，其8-甲氧基部分还提高了抗革兰阳性菌的活性，特别是增加了对厌氧菌的抗菌活性[1]，其对非典型病原菌，如肺炎支原体、衣原体及军团菌均有显著疗效[2-3].莫西沙星侧链是合成盐酸莫西沙星最为关键的起始物料.目前，莫西沙星侧链主要的合成工艺路线如图1所示.

图1莫西沙星侧链合成工艺路线

莫西沙星侧链为无色至棕色黏稠液体，其在合成过程中使用了有机溶剂，包括乙酸乙酯、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、甲醇及醋酐等.

对此，本研究根据各有机溶剂性质和沸点的不同，参照《中国药典》2015年版对残留溶剂的要求，采用气相色谱法与残留溶剂测定法[4-5]对莫西沙星侧链产品中乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、甲苯、(4AS，7AS)-八氢-6-(苯甲基)-1H-吡咯并[3,4-B]吡啶(M-11)、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇的残留情况进行了测定与分析[6].

1 材料与仪器

1.1 材 料

实验所用材料包括：莫西沙星侧链(批号，P075170501、P075170701、P075170801)、(4AS,7AS)-八氢-6-(苯甲基)-1H-吡咯并[3,4-B]吡啶(批号，170501)，购自江苏宇田医药公司；乙醇(批号，2015051401，HPLC级)购自成都科龙化工试剂厂；乙酸乙酯(批号，20150128，HPLC级)，购自天津科密欧有限公司；甲醇(批号，20160205，HPLC级)，购自百灵威有限公司；N，N-二甲基甲酰胺(批号，141171101，HPLC级)、四氢呋喃(批号，041170201，HPLC级)，购自上海星可高纯溶剂有限公司；其余试剂均为分析纯.

1.2 仪 器

实验所用仪器包括：7890A型气相色谱仪(安捷伦科技有限公司)；BP-210D型电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司).

2 方法与结果

2.1 色谱条件

实验的色谱条件为：以6%氰丙基苯基—94%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱(DB-624，30 m×0.32 mm×1.8 μm)，柱温80 ℃，维持5 min后，以8 ℃/min的速率升温至200 ℃，维持15 min；检测器为氢火焰离子化检测器，检测温度为270 ℃，进样口温度为250 ℃，载气流速3.0 mL/min，分流比10∶1；直接进样量为1.0 μL.

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液配制.

精密称取甲醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11适量，加乙醇稀释制成每1 mL中分别约含1.5 mg、2.5 mg、0.36 mg、0.001 mg、0.45 mg、0.44 mg、0.5 mg的混合溶液，作为对照品溶液.

2.2.2 供试品溶液配制.

精密称取莫西沙星侧链—乙醇(1∶1)的溶液，混匀，作为供试品溶液.

2.3 系统适用性实验

取“2.2.1”项下的对照品溶液1.0 μL，按“2.1”项下的色谱条件连续进样6次，记录数据，结果见表1～表4.

表1 系统适用性实验重复测定6次的峰保留时间

表2 系统适用性实验重复测定6次的峰面积统计结果

由表1～表4可知，在“2.1”项色谱条件下重复测定6次的峰保留时间、峰面积、分离度、拖尾因子的参数均能到达验证要求，表明该条件下的系统适用性良好.

表3 系统适用性实验重复测定6次的分离度统计结果

表4 系统适用性实验重复测定6次的拖尾因子统计结果

2.4 检测限与定量限

取甲醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11适量，分别加乙醇溶解并稀释制成一定浓度的溶液，直接进样，记录数据.计算出：甲醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11的检测限分别为0.24 ng、0.29 ng、0.55 ng、0.27 ng、0.591 ng、34.00 ng、7.91 ng；定量限分别为0.96 ng、1.02 ng、1.83 ng、0.76 ng、2.12 ng、99.34 ng、38.37 ng.

根据各成分检测限结果发现，能完全检测出本品中残留溶剂的样品浓度为133 mg/mL.为保证样品检测的准确性，确定样品浓度为0.5 g/mL.

2.5 线性与范围

取甲醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11适量，精密称定，分别加乙醇溶解并稀释制成每1 mL约含7.47 mg的甲醇、12.63 mg的乙酸乙酯、1.80 mg的四氢呋喃、0.01 mg的苯、2.25 mg的甲苯、2.20 mg的N,N-二甲基甲酰胺、2.53 mg的M-11的溶液，再分别取上述溶液用乙醇逐级稀释成适宜浓度的供试品溶液.分别精密量取上述供试品溶液各1.0 μL进样，记录数据，以各溶剂浓度对峰面积进行线性回归并计算相关系数.结果表明，在0.000 2～12.627 8 mg/mL范围内，甲醇(Y=765.405 3X-10.852 1，R2=0.999 9)、乙酸乙酯(Y=890.075 8X-18.277 3，R2=1.000 0)、四氢呋喃(Y=1 190.200 2X-3.442 7，R2=1.000 0)、苯(Y=2 274.870 5X+0.092 0，R2=0.999 9)、甲苯(Y=2 268.262 7X-9.847 0，R2=1.000 0)、N,N-二甲基甲酰胺(Y=542.953 4X+1.020 1，R2=0.999 9)、M-11(Y=1 310.041 9X-110.123 9，R2=0.998 8)的峰面积与浓度均呈良好的线性关系.

2.6 回收率实验

取甲醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11适量，精密称定，分别加乙醇溶解并稀释制成每1 mL约含7.466 75 mg的甲醇、12.627 75 mg的乙酸乙酯、1.804 2 mg的四氢呋喃、0.005 995 mg的苯、2.252 55 mg的甲苯、2.199 7 mg的N,N-二甲基甲酰胺、2.532 25 mg的M-11的混合储备液.

取莫西沙星侧链各约480 mg(0.5 mL的侧链)，共10份，精密称定，取3份分别精密加入上述混合储备液0.1 mL、乙醇0.4 mL作为50%的供试品溶液；取3份分别精密加入上述混合储备液0.2 mL、乙醇0.3 mL作为100%的供试品溶液；取3份分别精密加入上述混合储备液0.3 mL、乙醇0.2 mL作为150%的供试品溶液；剩余1份加入0.5 mL乙醇作为供试样品溶液.分别取上述供试品溶液、供试样品溶液、“2.2.1”项下的对照品溶液各1 μL进样，按外标法计算甲醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11测得量及回收率，结果如表5所示.实验表明，各残留溶剂回收率满足要求.

表5 残留溶剂平均回收率

2.7 重复性实验

分别取6份莫西沙星侧链约480 mg(0.5 mL的侧链)，并分别加“2.6”项下的混合储备液0.2 mL和乙醇0.3 mL，混匀，制得供试品溶液(临用新配).取供试品溶液、“2.2.1”项下的对照品溶液各1 μL进样，记录数据，计算出甲醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11结果的RSD分别为2.17%、2.12%、2.15%、2.76%、2.16%、1.86%、1.27%.结果表明，本方法的重复性好.

2.8 溶液稳定性实验

溶液稳定性实验的条件同“2.1”项下，使用“2.7”项下供试品溶液分别在0 h、1 h、2 h、6 h进样，记录数据，统计甲醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11的峰面积，结果如表6所示.

表6 溶液稳定性实验峰面积结果统计

由表6可知，在6 h内连续进样，除乙酸乙酯峰面积在逐渐降低外，其他成分峰面积在6 h内基本无变化.因此，在测定该样品时应临用新配.

2.9 耐用性实验

取莫西沙星侧链各约480 mg(0.5 mL的侧链)，共8份，精密称定，分别加入“2.6”项下的混合储备液0.2 mL和乙醇0.3 mL，作为供试品溶液.分别取上述供试品溶液、“2.2.1”项下的对照品溶液各1 μL进样，微小改变色谱条件测定，记录数据，按外标法计算甲醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11测得量及回收率，结果如表7所示.结果表明，本方法耐用性良好.

表7 耐用性实验结果

2.10 样品测定

分别取3批样品，按“2.2”项下的方法配制对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行检测，记录数据，按外标法计算样品中甲醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11的残留量.结果显示，P075170501、P075170701、P075170801样品中的DMF残留量分别为0.007 9%、0.008 9%、0.002 5%，其他溶剂残留均未检出.

3 讨 论

实验结果显示，气相色谱法及残留溶剂测定法能有效、准确地测出莫西沙星侧链的残留溶剂.本研究规定莫西沙星侧链中甲醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11的残留不得大于0.30%、0.50%、0.072%、0.000 2%、0.089%、0.088%、0.05%，符合2015年版《中国药典》相关规定[4].本研究还发现，莫西沙星侧链中可能会残留M-11，而M-11，在拆分生成侧链时会产生甲苯，所以在莫西沙星侧链的残留溶剂实验中，一并将M-11、甲苯、苯进行研究并控制.此外，由于醋酐通常会在盐酸莫西沙星的质量控制中进行限度设定，所以本研究在莫西沙星侧链实验中未对醋酐进行限度控制.