150例高胆红素血症新生儿溶血三项检测及相关影响因素分析

吴淑华，苗 锐

(湖南省永州市中心医院检验科,湖南永州 425000)

新生儿溶血病(HDN)，又称母儿血型不合溶血病，是一种与遗传相关的免疫性溶血疾病，以高胆红素血症为主要临床表现，严重者可导致新生儿胆红素脑病，造成新生儿智力低下甚至死亡。因此，对高胆红素血症新生儿溶血病进行早期诊断、及早干预，是避免胆红素脑病的关键诊疗工作。

高胆红素血症新生儿溶血病最常见发病原因为新生儿ABO血型不合，主要发生在母亲血型为O型，新生儿血型为A型或者B型。如母婴血型存在不合，应尽早预测是否有发生新生儿溶血性疾病的可能，以及判定发生高胆红素血症的危险程度及其影响因素，以便实现早期干预，避免并发症的发生[1]。

目前，临床上对HDN的检测主要为溶血三项检测，即直接抗人球蛋白试验(直接试验)、抗体释放试验(释放试验)和游离抗体试验(游离试验)。本研究选取了本院血液中心2016年6月至2018年6月150例患有高胆红素血症的HDV患儿，进行溶血三项检测及血清总胆红素测定，并收集患儿临床资料，从而对高胆红素血症新生儿溶血三项检测及相关影响因素进行分析，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年6月至2018年6月送检本中心的150例确诊为ABO血型不合导致高胆红素血症新生儿溶血病(ABO-HDN)的新生儿标本(ABO-HDN组)及母血标本，所有新生儿母亲的血型均为O型，Rh(D)阳性，出生时间在3 h至12 d，其中，男78例，女72例；血型A型患儿85例，血型B型患儿65例。同时，选取出生时间在3 h至12 d的健康新生儿150例作为对照组，男76例，女74例，血型A型者83例，血型B型者67例，对照组与ABO-HDN组在年龄、性别、血型等基础资料方面差异无统计学意义(P>0.05)。所有患儿进行新生儿溶血三项检测及血清总胆红素测定，母亲血清进行IgG抗体效价测定，并收集患儿临床资料。

1.2诊断标准

1.2.1HDN诊断标准[2](1)母婴ABO血型或者Rh血型不合；(2)抗体释放试验结果为阳性或三项试验中2～3项为阳性，均可诊断为HDN。

1.2.2新生儿高胆红素血症诊断标准[3](1)足月新生儿血清胆红素>220.6 μmol/L(12.9 mg/dL)，早产儿血清胆红素>256.5 μmol/L(15 mg/dL)；(2)排除同时≥2个病因导致的高胆红素血症(如肝脏疾病、胆汁淤积症或肾脏疾病等)。

1.3仪器与试剂 标准抗-A、抗-B血清；抗-D血清、抗体筛选红细胞、2-巯基乙醇试剂、抗人球蛋白试剂采购于上海血液生物医药有限公司，HDN微柱凝胶检测卡、血型专用离心机、37℃孵育器采购于长春博迅生物技术有限公司。

1.4方法 ABO血型鉴定、溶血三项检测(直接试验、释放试验和游离试验)参照《全国临床检验操作规程》第4版的方法进行；母亲血清IgG抗体效价采用微柱凝胶卡片法进行；新生儿血清总胆红素测定采用贝克曼AU5800全自动生化仪进行。

2 结 果

2.1150例高胆红素血症ABO-HDN患儿血型检测结果 经临床统计，150例ABO-HDN，母O子A不合者为85例占56.67%(85/150)，母O子B不合者为65例占43.33%(65/150)，A型患者的阳性率高于B型患者。见表1。

表1 150例高胆红素血症ABO-HDN患儿血型检测结果

2.2150例高胆红素血症ABO-HDN患儿血清溶血三项检测结果 150例高胆红素血症ABO-HDN患儿进行血清溶血三项检测结果显示：直接试验、游离试验和释放试验阳性率分别为20%、37.33%和100%。O-A组和O-B组组间进行比较，发现两组间直接试验、游离试验、释放试验的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 150例高胆红素血症ABO-HDN患儿血清溶血 三项检测结果[n(%)]

2.3150例高胆红素血症ABO-HDN患儿溶血三项检测结果与血清总胆红素结果 150例高胆红素血症ABO-HDN患儿血清溶血三项检测阳性构成结果、血清总胆红素结果见表3。结果显示：溶血三项检测阳性构成，三项阳性率为7.33%(11/150)，两项阳性率为42.67%(64/150)，一项阳性率为50.00%(75/150)。总胆红素结果显示：高胆红素血症ABO-HDN患儿总胆红素水平较对照组明显增高，差异有统计学意义(P<0.01)，试验组中以三项阳性组的总胆红素升高最明显，但较两项阳性和一项阳性组差异无统计学意义(P>0.05)。

表3 150例高胆红素血症ABO-HDN患儿溶血三项检测 结果与血清总胆红素结果分析

注：*表示总胆红素水平与对照组相比较,P<0.05；/表示无数据

2.4150例高胆红素血症ABO-HDN患儿溶血三项检测结果与送检时间的关系 150例高胆红素血症ABO-HDN患儿溶血三项检测结果与送检时间的关系见表4。在24 h内送检，血清溶血三项检测结果阳性率最高，为46.67%(70/150)，且随着黄疸发生时间的延长，溶血三项检测结果阳性率逐渐减低。

2.5150例高胆红素血症ABO-HDN患儿与母亲血清IgG抗体效价分布 150例高胆红素血症ABO-HDN患儿母亲血清IgG抗体效价为1∶16～1∶64的共13例(13/150,8.67%)，母亲血清IgG抗体效价为1∶128～1∶256的共121例(121/150，80.67%)，母亲血清IgG抗体效价为1∶512的共16例(16/150,10.67%)，见表5。

表4 150例高胆红素血症ABO-HDN患儿溶血三项检测 结果与送检时间的关系

表5 150例高胆红素血症ABO-HDN患儿与母亲血清 IgG抗体效价分布(n)

3 讨 论

HDN是由于母亲血清IgG抗体使得胎儿红细胞发生致敏反应，从而导致红细胞在网状内皮系统中被异常破坏，通过血清学检查可检测到高胆红素血症。因此，HDN与母婴血型是否相合、母亲血清中是否存在抗婴儿红细胞IgG抗体，母亲IgG抗体是否致敏婴儿红细胞这三点有着重要关系。

HDN的临床诊断并不困难，根据患儿一系列临床表现，结合实验室检查，即可作出诊断。而实验室检查中的血清学检查是其主要的诊断依据，血清学溶血三项检测中的直接试验是为了检测新生儿红细胞是否已经被母亲血清中的IgG抗体致敏，游离试验和释放试验是为了检测新生儿血清中是否存在IgG类抗体，因此溶血三项检测在HDN中具有重要的诊断价值。其中，释放试验在HDN的诊断中敏感度最高，也是判定HDN的最有力证据[4-5]。

高胆红素血症是HDN的最常见临床症状，以未结合胆红素升高为主，胆红素可透过血-脑屏障而沉积在中枢核团，导致胆红素脑病进而危及新生儿生命[6-7]。本研究发现母子血型为O-A型阳性率高于母子血型O-B型，这与杨冬梅等[8]的报道一致，可能与婴儿红细胞膜上A抗原决定簇多于B抗原决定簇，与IgG抗体结合力强有关。研究中统计发现，150例高胆红素血症ABO-HDN患儿的溶血三项检测结果为直接试验、游离试验和释放试验阳性率分别为20.00%、37.33%和100.00%，母子血型不合O-A型组和O-B型组三项结果差异并无统计学意义，这与国内谢楠楠等[9]的研究结果一致，即直接试验阳性率最低，释放试验阳性率最高，这可能与三项试验的设计原理有关。释放试验因为红细胞的大量破坏，细胞膜上的IgG抗体被释放出来，因此具有较高的灵敏度。而直接试验因为抗原密度在新生儿红细胞上相对较低，吸附抗体能力较小，因此结果常呈弱阳性或者阴性。

从表3中可以发现，ABO-HDN组血清总胆红素水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)，溶血三项测试阳性结果显示，当三项均为阳性时，血清总胆红素水平最高，结合患者临床资料，发现三项均阳时，患儿的临床病情最重。从表4中可以看出患儿血清溶血三项检测与黄疸发生时间有着密切关系：在24 h内送检，血清溶血三项检测结果阳性率最高，为46.67%(70/150)，且随着黄疸发生时间的延长，溶血三项检测结果阳性率逐渐减低。这表明应尽早采集患儿血液送检，可能原因为随着病程进展，致敏红细胞逐渐溶解，血型抗体将被中和而失去抗原性，从而使得溶血三项检测阳性率减低。因此，尽早加强总胆红素测定有助于评估HDN患者的病情，有助于早治疗、减少并发症、降低对患儿的伤害。

有研究表明[10-11]，孕妇血清中IgG抗体效价与胎儿的受损害程度呈正比，本文的检测结果发现，150例高胆红素血症ABO-HDN患儿母亲血清IgG抗体效价主要集中在1∶128～1∶256，这提醒临床工作中对母体血清IgG抗体的效价进行准确测定，对诊断和预防高胆红素血症ABO-HDN有着重要意义。

综上所述，当母体血型为O型时，ABO-HDN中A型新生儿发病率高于B型新生儿；血清溶血三项试验检测结果，以释放试验阳性率最高，直接试验阳性率最低；ABO-HDN血清学溶血三项检测阳性率与标本送检时间及胆红素水平有着密切关系；ABO-HDN患儿母亲血清IgG抗体效价主要集中在1∶128～1∶256。因此，对ABO血型不合导致的高胆红素血症新生儿溶血，应尽早行血清学溶血三项试验，对早诊断、早治疗，减少并发症，缩短病程等有着重要意义。