油瓜的化学成分研究

李 会，王 蔷，易春蝶，樊保敏，曾广智，尹俊林

(1.云南民族大学 云南民族大学-香港浸会大学传统天然药物研发联合实验室,云南 昆明 650500; 2.云南民族大学 民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室，云南 昆明 650500)

油瓜(Hodgsoniamacrocarpa)，别名油渣果、猪果、有棱油瓜、渣果、麻井(傣语)等，为葫芦科油渣果属多年生木质藤本植物.该属植物仅含1种及1变种，即H.macrocarpa及其变种腺点油瓜(H.macrocarpaVar.Capniocarpa)，主要分布于我国的云南、两广及西藏.H.macrocarpa的种子富含油脂，可食用，因其食用味道似油渣，故又称油渣果[1].目前该属植物化学成分研究较少，仅有H.capniocarpa种子中油脂成分的分析报道.油瓜种仁含油量高达70%，远高于大豆、油菜、小桐子等生物柴油原料植物的含油量，主要包括脂肪酸和甘油脂[1-3]，其脂肪酸由14～18个碳链组成，组分与由15个碳链组成的柴油十分相近，可利用其特点，发展对能源战略和经济发展具有重要意义的生物柴油[4].油瓜在民间具有较好的食用及药用基础，烤熟后的种仁为多个少数民族所喜食；其根、茎、叶、果皮、仁均可入药，主要用于结石、拉肚子、痔疮、皮肤病、胃病、风湿、伤寒、血吸虫等病症的治疗[5].其植株的各个药用部位因加工方式的不同所治疗疾病的类型也有所不同，根茎与草果一起煨水喝可以治疗结石，具有消炎的作用；油瓜叶可用于治疗脚肿痛、肾结石、肾炎等病症；油瓜内果皮(果肉)白色，味苦、易氧化，新鲜果肉切片晒干煮水喝可治疗肚子疼，煎服可治疗胃病[5].因此，有必要对其化学及活性成分开展研究.

对油瓜的化学成分开展了研究，从中分离得到5个化合物，其中化合物2和3具有一定的抗氧化作用，因此可以为油瓜在民间用药上具有的抗炎症，肾炎等疾病提供理论依据，具有一定研究价值.

1 材料与方法

1.1 实验材料

油瓜植物样本，2016年1月底采集于云南西双版纳基诺山，植物样品经中科院昆明植物研究所裴盛基研究员鉴定，植物标本保存于云南民族大学-香港浸会大学传统天然药物研发联合实验室.

1.2 仪器与试剂

DRX-500 和DRX-400 型核磁共振仪(Bruker 公司，瑞士)；Kofler Sartorius-BS124S 型电子分析天平(Sartorius公司，德国)；IKA HB10旋转蒸发仪(上海圣科仪器设备有限公司，中国)；柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂，中国)；1260 Infinity 型HPLC(Agilent Technologies公司，美国)；6420 Triple Quad LC/MS(Agilent Technologies公司，美国)；SpectraMax i3X多功能微孔板检测器(Molecular Devices公司，美国)；Sephadex LH-20(Pharmacia 公司，美国)；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)(东京化成工业株式社会，日本)；其他化学试剂均为国产分析纯.

1.3 实验方法与步骤

干燥油瓜根、茎、叶共12 kg，样品粉碎后经甲醇加热回流提取3 次，每次2 h，减压浓缩后得浸膏.干燥后浸膏(600 g)总提物经常压硅胶柱色谱(100～200目)分离，使用V(氯仿)∶V(甲醇)=(95∶5、9∶1、8∶2、7∶3、1∶1)梯度洗脱，得到12个部分(Fr. 1～12).其中Fr. 3 经过硅胶和SephadexLH-20 柱色谱，得到化合物1(12 mg)，化合物2(14 mg).Fr. 5 经过硅胶和SephadexLH-20 柱色谱，得到化合物3(12 mg).Fr. 8经过硅胶用50%水洗脱，并采用反相MCI柱色谱后再用V(氯仿)∶V(甲醇)∶V(H2O)=(6∶2∶0.1→6.5∶3.5∶0.1)梯度洗脱，得到化合物4(30 mg)和化合物5(100 mg).

1.4 抗氧化实验

采用自由基清除反应——DPPH实验评价化合物的抗氧化活性.将化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中备用，将稀释好的样品加入96孔板中，每孔5 μL，之后加入用甲醇稀释的0.025 g/L的DPPH溶液，每孔195 μL，混匀后室温反应20 min后用微孔板检测器于515 nm波长下检测吸收值.同时设置DMSO组为阴性对照，根据以下公式计算化合物清除自由基DPPH的百分有效率，再根据量效关系图计算EC50(半数有效浓度)值.

其中NC为溶媒对照组；Sample为测试样品组.

2 结构鉴定

从油瓜中分离得到了5个化合物，其化学结构(图1)和光谱数据如下所示.其中化合物1、2、3为首次从该植物中分离得到.通过DPPH自由基清除反应对化合物1、2、3的抗氧化能力进行了测试，结果显示化合物2和3具有一定的自由基清除能力，其对DPPH自由基清除的EC50值分别为0.54±0.10和1.45±0.33 mg/mL.

化合物1黄色片状结晶.ESI-MS (m/z): 277 [M+Na]+(C15H10O4).1H NMR (500 MHz, CDCl3),δ:7.82(1H, dd,J= 10.5 Hz, 1.05 Hz, H-5), 7.61 (1H, br s, H-6), 7.60 (1H, s, H-4), 7.29 (1H, dd,J= 8.4 Hz, 1.05 Hz, H-7), 7.05 (1H, br s, H-2).13C NMR(125 MHz, CDCl3)δ: 192.5 (C-9), 182.0 (C-10), 162.7 (C-8), 162.4 (C-1)，149.3 (C-3), 136.9 (C-6), 133.6 (C-l0a), 133.2 (C-4a), 124.5 (C-2), 124.3 (C-7), 121.3 (C-4), 119.9 (C-5), 115.8 (C-8a), 113.7 (C-9a), 22.8 (C-CH3).以上数据与文献[6]对照基本一致，故鉴定化合物为大黄酚(chrysophanol).

化合物2橙黄色针状结晶.ESI-MS (m/z): 283 [M+Na]+(C16H12O5).1H NMR (500 MHz, CDCl3)δ:12.31 (1 H,s, OH-1), 12.12 (1 H, s,OH-11), 7.61 (1 H, d,J= 1.2 Hz, H-4), 7.35 (1H, d,J= 2.5 Hz, H-5), 7.07 (1H, s, H-2), 6.68 (1H, d,J= 2.5 Hz, H-7), 3.90 (3H, s, CH3-9), 2.44 (3H, s, CH3-3).13C NMR(125 MHz, CDCl3),δ:190.8 (C-9), 182.0 (C-10), 166.5 (C-6), 165.2 (C-8), 162.5 (C-1), 148.5 (C-3), 135.2 (C-l0a), 133.2 (C-4a), 124.5 (C-2), 121.3 (C-4), 113.7 (C-9a), 110.2 (C-8a), 108.2 (C-S), 106.8 (C-7), 56.1 (C-OCH3), 22.2 (C-CH3).以上数据与文献[7]对照基本一致，故鉴定化合物为大黄素甲醚(physcion).

化合物3针状晶体.13C NMR(125 MHz, D2O),δ: 26.2 (C-1), 56.5 (C-2), 105.8 (C-3), (C-4), 128.9 (C-5), 139.7 (C-6), 146.7 (C-7).以上数据文献[8]对照基本一致，故鉴定化合物为(2,6-Dimethoxy-4-methylphenol).

化合物4白色结晶.13C NMR(125 MHz, D2O),δ: 103.6 (C-1), 92.1 (C-2), 81.3 (C-3), 76.2 (C-4), 73.9 (C-5), 72.5 (C-6), 72.3 (C-7), 71.0 (C-8), 69.1 (C-9), 62.3 (C-10), 61.2 (C-11), 60.0 (C-12).以上数据文献[9]对照基本一致，故鉴定化合物为蔗糖(sucrose).

化合物5白色针晶，Molish反应呈阳性，1H NMR (500 MHz, D2O),δ: 5.43 (1H, d,J= 3.6,1-H), 3.45～3.76 (m, H-2～6).13C NMR(125 MHz, D2O,δ:93.9 (C-1), 74.7 (C-30), 73.7 (C-5), 72.8 (C-2), 71.8 (C-4), 62.6 (C-6).以上数据与文献[10]对照基本一致故鉴定化合物为葡萄糖(glucose).