miR-200b-3p在溃疡性结肠炎患者血清中的表达及意义

溃疡性结肠炎(UC)易复发，若治疗后肠黏膜愈合则可降低住院率和手术相关风险[1-2]。目前，临床常通过评估肠道炎性反应来判断肠黏膜的愈合状况，但存在一定的不足。UC活动指数、Mayo评分及Truelove-Witts分级等临床评分可反映UC患者的主观症状和总体幸福感，此外，部分缓解期UC患者仍可能存在持续的黏膜炎性反应[3]。部分血清学标志物反映的是全身性的炎性反应状态，对肠道炎性反应状态的判断缺乏特异性[4]。肠镜是判断UC患者肠道黏膜状况的金标准[5]，但其属于侵入性检查，耗时较长且不能实时评估UC患者的黏膜病变情况[6]。

UC相关黏膜发育异常(UC-DYS)是UC患者的远期并发症，随着UC患者的病程延长，UC-DYS的发病率逐渐升高。目前临床常用普通白光内镜检查UC患者的黏膜病变情况，容易忽视多灶性损伤，致使UC-DYS的筛查率较低，随着UC-DYS患者病程延长易进展为UC相关结直肠癌。微RNA(miRNA)是一类由20～25个核苷酸组成的非编码RNA，主要负责调控细胞的增殖、分化、转移及凋亡等，参与机体多种生理活动[7-8]。近年来有研究显示，miR-200b-3p在UC-DYS组织中高表达，但并未阐明miR-200b-3p与UC内镜下状态及严重程度的关系[9]。本研究通过比较UC患者与健康者血清miR-200b-3p的相对表达量，以期阐明miR-200b-3p与UC内镜下状态、严重程度及UC-DYS的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年8月至2018年9月监利县人民医院收治的92例UC患者(UC组)作为研究对象。根据《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年·广州)》[10]进行UC诊断，并经内镜及组织病理学检查确诊。纳入标准：(1)年龄18～70岁；(2)临床资料完整；(3)签署知情同意书。排除标准：(1)合并严重感染；(2)合并肿瘤及自身免疫性疾病；(3)严重肝、肾功能不全；(4)服用非甾体抗炎药物。另择36例同期健康体检者(对照组)及44例经病理活组织检查确诊的UC-DYS患者(UC-DYS组)作为对照。UC组男性48例，女性44例，平均年龄(45.22±9.74)岁；内镜下缓解期患者35例，内镜下活动期患者57例，其中轻、中度患者37例，重度患者20例。对照组男性22例，女性14例，平均年龄(46.07±9.16)岁。UC-DYS组男性25例，女性19例，平均年龄(47.30±10.28)岁；37例(84.09%)低度异型增生，7例(15.91%)高度异型增生。3组受试者在性别(χ2=0.896，P=0.639)、年龄(F=0.680，P=0.508)方面的差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 信息收集 收集受试者的性别、年龄、内镜下状态、疾病严重程度等信息。

1.2.2 内镜下活动度分级及溃疡性结肠炎内镜下严重度指数 采用溃疡性结肠炎内镜下严重度指数(UCEIS评分)对UC患者受累肠段病变严重处进行评分，从血管纹理、出血情况、糜烂和溃疡这3个方面对受累肠段进行评估。血管纹理评分范围为0～2分，出血情况为0～3分，糜烂和溃疡为0～3分，分数越高代表越严重。内镜下缓解期UC患者的UCEIS评分为0～1分，0分为肠镜下未见异常，表示黏膜愈合；1分为镜下炎性细胞浸润，表示黏膜病变。内镜下活动期UC患者的UCEIS评分为2～8分，其中轻、中度患者的UCEIS评分为2～6分，重度患者的UCEIS评分为7～8分[11]。

1.2.3 RT-qPCR法检测血清miR-200b-3p的相对表达量 抽取受试者肘静脉血10 mL，3 500 r/min离心15 min，提取血清至EP管中，低温环境下保存待检。采用miRNAesy Kit试剂盒(购自英国Qiagen公司)提取总RNA，若OD260/280范围在1.75～1.95之间，则进行后续操作。将2 μg总RNA置于逆转录试剂盒中合成cDNA。取cDNA进行实时荧光定量PCR反应，反应条件为90 ℃ 15 min预变性；95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 20 s，共40个循环。△△Ct=(Ct目的基因-Ct内参基因)实验组-(Ct目的基因-Ct内参基因)对照组，采用2-△△Ct表示miR-200b-3p的相对表达量。引物序列见表1。

表1 引物序列

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 3组的血清miR-200b-3p表达

对照组、UC组和UC-DYS组血清miR-200b-3p的相对表达量分别为1.24±0.40、3.49±1.02和4.80±0.91，差异有统计学意义(P<0.001)。UC组的血清miR-200b-3p相对表达量高于对照组，但低于UC-DYS组，差异均有统计学意义(P均<0.05)。

2.2 不同UC内镜下状态及严重程度的患者的血清miR-200b-3p表达

内镜下活动期的UC患者血清miR-200b-3p的相对表达量为4.03±0.78，高于内镜下缓解期者(2.60±0.71)，差异有统计学意义(t=-8.845，P<0.001)。在内镜下活动期UC患者中，重度患者血清miR-200b-3p的相对表达量为4.73±0.47，高于轻、中度患者(3.65±0.64)，差异有统计学意义(t=-6.619，P<0.001)。

2.3 miR-200b-3p与UCEIS的相关性分析

UC组患者血清miR-200b-3p的相对表达量与UCEIS呈正相关关系(rs=0.912，P<0.001)。见图1。

图1 血清miR-200b-3p的相对表达量与UCEIS的相关性分析

2.4 miR-200b-3p诊断UC内镜下状态、严重程度及UC-DYS的效能

miR-200b-3p诊断UC内镜下状态、严重程度及UC-DYS的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.911(95%CI：0.834～0.961)、0.914(95%CI：0.809～0.972)和0.824(95%CI：0.750～0.884)。当miR-200b-3p>3.57时诊断UC内镜下状态有较高的准确度，其敏感度和特异度分别为77.19%和88.57%。当miR-200b-3p>4.08时诊断活动期UC严重程度具有较高的准确度，其敏感度和特异度分别为100.00%和72.97%。当miR-200b-3p>3.81时诊断UC-DYS有较高的准确度，其敏感度和特异度分别为95.45%和58.70%。见图2和表2。

图2miR-200b-3p诊断UC内镜下状态、严重程度及UC-DYS的ROC曲线AUC内镜下状态B活动期UC严重程度CUC-DYS

表2 miR-200b-3p诊断UC内镜下状态、严重程度及UC-DYS的效能

3 讨论

miR-200b-3p参与机体多种生理活动，有研究表明其可参与调节单核细胞及巨噬细胞的分化[12]。此外，有多项研究表明miR-200b-3p与前列腺癌、结直肠癌、乳腺癌、口腔鳞状细胞癌及胶质瘤等发生有关[13-17]。miR-200b参与炎症性肠病(IBD)肠上皮细胞的生长，其在IBD病变的黏膜中表达量降低[18]。miR-200b-3p属于miR-200b的一员，但有研究表明其在UC-DYS患者的病变黏膜中呈高表达[9]。本研究选取92例UC患者和44例UC-DYS患者作为研究对象，通过分析两组患者血清miR-200b-3p的表达水平，以期阐明miR-200b-3p与UC发生、发展的关系。

本研究结果显示，对照组、UC组和UC-DYS组的血清miR-200b-3p相对表达量的差异均有统计学意义。UC组的血清miR-200b-3p相对表达量高于对照组，但低于UC-DYS组。但Lewis等[9]的研究表明，UC患者与UC-DYS患者的血清miR-200b-3p表达量差异无统计学意义，这可能与样本量、人种及个体差异有关，需进一步研究验证。此外，本研究比较了内镜下不同状态及不同严重程度的UC患者血清miR-200b-3p的相对表达量，结果显示内镜下活动期UC患者的血清miR-200b-3p相对表达量高于内镜下缓解期者；而在内镜下活动期UC患者中，重度患者的血清miR-200b-3p相对表达量高于轻、中度患者。上述结果表明miR-200b-3p与UC发生、发展密切相关。

目前临床上常用Mayo内镜评分和UCEIS评分评价UC患者的黏膜病变程度，但由于Mayo内镜评分以黏膜脆性为分级标准，容易受到临床医师的主观影响，致使各医师对UC患者的评估结果并不一致[19]。而UCEIS主要从血管纹理、出血情况、糜烂和溃疡这3个方面评价黏膜病变情况，对黏膜病变程度的评价更为细致、全面[20]。另有研究表明，UCEIS评分在评价UC患者临床转归及远期预后方面的准确度高于Mayo内镜评分[11]。此外，本研究表明miR-200b-3p评价UC内镜下状态、严重程度及UC-DYS均有较高的临床价值。本研究的样本量偏小，且为单中心研究，可能因样本量小及个体差异等原因导致研究结果出现偶然性和随机性。后续需扩大样本量，进行多中心研究，同时进行多因素回归分析以进一步阐明miR-200b-3p与UC内镜下状态、严重程度及UC-DYS的关系。

综上所述，miR-200b-3p与UC的发生、发展密切相关。检测UC患者血清miR-200b-3p的表达量有助于了解其UC内镜下状态、严重程度及UC-DYS的发生情况。