朱日亨滴丸中广枣鞣花酸含量测定

格格日勒,那生桑

(1.阿拉善盟蒙医医院 药品质量检查室,内蒙古 阿拉善盟750300；2.内蒙古医科大学 蒙医药研究院,内蒙古 呼和浩特010010)

朱日亨滴丸是在著名蒙医专家苏荣扎布教授治疗心脏病的蒙药验方——朱日亨水丸的基础上进行剂型改良而研制的新制剂,由广枣、红花、栀子等10味中药组成,具有清心热、化瘀血、补心之功效,可用于治疗心热、心赫依、心刺痛、心慌气短等病证,对冠心病有良好的疗效。

相关研究表明[1-4],朱日亨滴丸的君药广枣具有抵抗心律失常和心跳减慢、保护心肌缺血、影响血液动力学、抗氧化、提高免疫力、保护神经细胞和抗白血病等作用,其主要活性成分为黄酮类和酚酸类成分。本研究选择其酚酸类成分鞣花酸作为检测指标,并通过测定其含量来进行质量控制研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

超高效液相色谱仪WATERS HI3CHA；超声波清洗器KQ-250DE；微量电子天平AB135-S；电子天平JA5003N。

1.2 试药

鞣花酸对照品(批号201310),山东省分析检测中心提供；朱日亨滴丸,由内蒙古医科大学提供；乙腈为色谱纯；水为超纯水,其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶,本实验研究采用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150mm.5μm)；流动相：乙腈－0.1%磷酸水溶液(15∶85)；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：254nm；进样量：5μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取鞣花酸对照品1 mg,精密称定,置25 mL的容量瓶中,加甲醇配制成1 mL含0.04 mg鞣花酸的溶液,摇匀,作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品细粉0.5 g,精密称定,加甲醇10 mL,超声处理40 min,取出,冷却,用甲醇定容至10 mL量瓶中,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备 取处方药(缺广枣)按相同工艺制备成阴性对照品,按供试品溶液的制备法制备,作为阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验 按“2.1”项下色谱条件,精密吸取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照品溶液各5μL,分别进样。鞣花酸的出峰时间约为18.0min,鞣花酸与样品中其他组分色谱峰可达基线分离,且与相邻色谱峰分离度7.18,检测峰理论塔板数10 507,拖尾因子均在0.95～1.05,阴性对照样品无干扰。见图1。

图1 专属性色谱

2.3.2 线性关系考察 精密称取鞣花酸对照品,加甲醇制成每1 mL含0.005 mg鞣花酸的对照品溶液,精密吸取1、2、4、6、8、10μL,按“2.1”项下色谱条件,分别进样。以鞣花酸进样量(μg)为横坐标,鞣花酸峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得鞣花酸的回归方程为：Y＝5 009 988.493 2X－1 345.202 7(r＝0.999 7)。鞣花酸在0.005～0.05μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,见表1和图2。

表1 线性关系考察结果

图2 鞣花酸标准曲线

2.3.3 精密度试验 按“2.1”项下色谱条件,精密吸取供试品溶液5μL,连续进样6次,测定峰面积,结果鞣花酸峰面积的RSD为0.8%,表明仪器的精密度良好。

2.3.4 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液适量,室温下放置,于0、2、6、8、12、24h分别进样5μL,按“2.1”项下色谱条件测定,考察其稳定性。鞣花酸峰面积RSD为0.6%,结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.5 重复性试验 取同一批样品,共6份,精密称定,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,分别进样5μL,按“2.1”项下色谱条件进行测定,考察其重复性。鞣花酸峰面积RSD为1.7%,结果表明,上述方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验 精密称取0.25g已知含量的样品共六份,分别精密加入0.142 5 mg鞣花酸对照品,按“2.2.2”项下方法制备,分别进样5μL,按“2.1”项下色谱条件进行测定,计算回收率,结果鞣花酸平均回收率为101.36%。结果见表2。

表2 加样回收率试验结果

2.4 样品含量测定

取3批不同批次的朱日亨滴丸,按“2.2.2”项下方法制备,分别进样5μL,按“2.1”项下色谱条件进行测定,计算鞣花酸的含量,结果见表3。

表3 含量测定结果

3 讨论

本方中其他组分对鞣花酸的测定无干扰,且据报道,鞣花酸具有抗氧化、凝血、降血压、镇静、抗缺氧缺血所致心脑疾病、抗癌等药理作用[5-9],较符合此成方制剂中广枣的功效。因此本实验以鞣花酸为检测指标,采用HPLC法测定朱日亨滴丸中广枣的含量,结果表明,本研究所用方法简便、灵敏、准确、重复性好,为建立朱日亨滴丸的质量标准及合理开发利用提供了实验依据。