黑曲霉脂肪酶CutA的芳香酯合成活性

丛珊滋，程磊，田康明，李梦迪，路福平*，王正祥*

1(天津科技大学 生物工程学院,工业发酵微生物教育部重点实验室，天津，300457) 2(天津科技大学 化工与材料学院，天津，300457)

芳香酯是天然存在于植物中的短链酯，赋予植物及其衍生产品宜人风味，主要包括乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯、辛酸乙酯和丁酸丁酯[1]。芳香酯也是食品、饮料、日化和制药工业等产品中的常用外加风味物质[2]。

目前，芳香酯多从自然资源中提取或由化学法合成制得[3]。前者收得率低、生产成本高且受气候和农业条件影响显著[4]；后者是目前芳香酯制备的主要方法，但环境不友好、产物分离纯化复杂、碳排放量高[2,5]。某些特殊类别的脂肪酶在非天然催化条件下对芳香酯的合成作用已被广泛研究[6-8]，这些脂肪酶也被应用于发酵食品、饮料的加工过程，以改善产品风味[9-11]。开发具有芳香酯合成能力的脂肪酶，对研究芳香酯酶法合成新技术及其在发酵食品、饮料生产中的应用具有极其重要的意义[12]。

为此，本文在分析黑曲霉基因组脂肪酶生物信息的基础上，对其中一个功能未知的脂肪酶进行基因克隆和表达，并就其酶学性质特别是芳香酯合成能力进行解析。

1 材料与方法

1.1 菌种

黑曲霉(Aspergillusniger)F0215、大肠杆菌(Escherichiacoli)JM109、毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115和质粒pPIC9k,均为本实验室保藏。

1.2 主要试剂

限制性内切酶和PyrobestTMDNA聚合酶,购自大连宝生物工程有限公司;质粒提取试剂盒和DNA纯化试剂盒,由北京庄盟国际生物基因科技有限公司提供;真菌RNA快速提取试剂盒、cDNA合成试剂盒和G418,为Invitrogen公司产品;BCA蛋白浓度测定试剂盒,为北京索莱宝科技有限公司产品;对硝基苯酚羧酸酯(C2～C16),购自Sigma公司；……