动物源食品中三聚氰胺残留量检测方法改进研究

高丽婷

摘 要：本文通过改变流动相的组成，对不同流动相的分离效果进行比较，考察了三聚氰胺保留时间及信噪比的变化，洗脱剂采用乙腈和含0.1%甲酸的乙酸铵溶液，可实现较好的分离效果。

关键词：三聚氰胺；流动相；动物源食品

三聚氰胺是一种含氮的杂环有机化合物，白色无味粉末，呈弱碱性，溶于热水，极微溶于热乙醇，长期摄入会造成生殖、泌尿系统损害，并可进一步诱发膀胱癌和输尿管肿瘤。但由于其含氮量远远高于氨基酸，也被不少非法企业用作食品添加剂掺入蛋白饲料，如用在鱼粉、大豆蛋白粉、肉松粉、玉米蛋白粉及饼粕原料等中来提高饲料中的表观蛋白质含量，以保证产品安全。畜禽在养殖过程中大多数要摄入饲料，这就增加了三聚氰胺残留风险。

近年來，使用液质法检测三聚氰胺的含量较为普遍，但是流动相系统却不一致。本文对不同流动相组成进行比较，乙腈较甲醇洗脱效果好；流动相中加入0.1%甲酸，有利于化合物离子化，并获得较好的分离效果和较高的灵敏度，最终选择乙腈-0.1%甲酸5 mmoL/L乙酸铵水溶液作为流动相。

1？材料与方法

1.1？仪器与试剂

串联质谱MS/MS API4000，电喷雾串联四级杆质谱仪（美国AB），岛津LC-30高效液相色谱仪（日本岛津），三聚氰胺标准品（德国Dr.Ehrenstorfer），甲醇、乙腈为色谱纯；去离子水，其他试剂均为分析纯。

1.2？仪器工作条件

色谱柱：UPLC BEH，2.1 mm×100 mm，1.7μm（Waters），流速：0.4 mL/min，柱温：38 ℃，进样量：4 μL，信号采集时间：4 min，电喷雾离子源，正离子扫描模式。

1.3？试验方法

本文采用GB 29704-2013[1]中对三聚氰胺的测定方法，流动相分别过0.22 μm滤膜，采用甲醇+0.5 mmol/L乙酸铵，甲醇+0.5 mmol/L乙酸铵（加 0.1%甲酸）和乙腈+0.5 mmol/L乙酸铵（加0.1%甲酸）3种流动相，三聚氰胺标准溶液进样量为4 μL，比较目标物的保留时间和信噪比变化。

2？结果与讨论

流动相对峰形、灵敏度及分离度都有较大的影响。本实验分别以乙腈和甲醇作为强洗脱溶剂，0.5 mmol/L乙酸铵溶液和0.1%甲酸作为辅助洗脱溶剂进行实验，对质量浓度为0.200 ng/mL的三聚氰胺标准溶液进行测定，得到不同流动相下的出峰保留时间以及信噪比，结果见表1，MRM离子流图见图1。

在流动相中加入甲酸可以提高检测灵敏度，增加峰面积，因为甲酸提供了H+，提高了离子化效率，同时可以抑制其他离子的生成。选择乙腈和含0.1%甲酸的乙酸铵溶液作为流动相时，目标化合物的响应值比用甲醇和含0.1%甲酸的乙酸铵溶液为流动相时低，可能是因为甲醇降低了目标化合物的离子化效率，其响应值亦随之降低，对杂质的分离效果差，保留时间延长，容易形成假阳性[2]。

选择乙腈和含0.1%甲酸的乙酸铵溶液作为流动相不仅保证了目标峰不受杂质峰的干扰，而且出峰较快、节约分析时间。因此本实验选择乙腈和含0.1%甲酸的乙酸铵溶液做缓冲溶液。

3？结论

本文采用GB 29704-2013中三聚氰胺的样品前处理方法，探究了甲醇+0.5 mmol/L乙酸铵，甲醇+0.5 mmol/L乙酸铵（加0.1%甲酸）和乙腈+0.5 mmol/L乙酸铵（加0.1%甲酸）3种流动相对三聚氰胺保留时间及信噪比的影响，选定了最佳的流动相为乙腈+0.5 mmol/L乙酸铵（加0.1%甲酸）。检测时间在4 min之内，保留时间为1.92 min，信噪比为395.1。该方法对检测动物源食品中三聚氰胺残留量具有实际应用价值。

参考文献

[1]中华人民共和国国家标准.GB 29704-2013 食品安全国家标准 动物性食品中环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺多残留的测定 超高效液相色谱-串联质谱法[S].北京：中国标准出版社，2013.

[2]胡梅，王骏，张卉，等.超高效液相色谱质谱/质谱测定禽蛋制品中三聚氰胺[J].山东农业科学，2010（1）：59-62.