肉类中氟苯尼考和氟苯尼考胺的残留量检测

李娜

摘 要：采用液质联合检测方法检测鸡肉中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量，利用碱性乙酸乙酯等完成色谱及质谱条件优化处理，完成电喷雾离子源正负模式切换，检测出其中的氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量，并通过不同水平的加标处理，观察回收率。该检测方法较为简便，具有较高的应用价值。

关键词：氟苯尼考；氟苯尼考胺；殘留

氟苯尼考作为氯霉素的隔代产品，在禽类及畜类动物感染疾病控制中应用广泛，具有良好的抗菌能力，安全性较高。随着研究的不断深入发现，氟苯尼考会导致胚胎毒性反应，动物在使用后易发生厌食及腹泻等反应。不正当的使用氟苯尼考也会导致禽类、畜类、水产品等动物体内残留药物，对食用者的健康造成不利影响。氟苯尼考代谢物是以氟苯尼考胺的形态存在，国家规定其最大残留量为100μg/ kg，可利用氟苯尼考代谢物等对氟苯尼考胺进行检测。在检测过程中构建高灵敏度的检测流程，从而满足检测需求。在本次研究过程中，对动物体中的氟苯尼考胺残留量进行检测，并形成以下报告。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择Dr.Ehrenstorfer公司的甲醇、氨水、乙酸乙酯、正己烷和一级水等配置储备液，并在4 ℃的环境中保存，选择标准规格的氟苯尼考、氟苯尼考胺、D5-氯霉素。

选择Agilent企业所生产的1200超高液相色谱仪-6410串联四级质谱，其中配置喷雾型离子源及U；traTurrax T25均质器，选择应用能效良好的20PR-520离心机。

1.2 方法

在50 mL的具塞容量管中加入2 g氟苯尼考、正己烷等，加入一定量的D5-氯霉素或者污无水硫酸钠，在管中继续加入15 mL乙酸乙酯及小剂量氨水。拿出规格等同的另一个具塞容量管，其中氨水及乙酸乙酯的剂量不发生变化，加入一定量的洗涤液进行混合，经过1 min的离心处理后，观察上清液的变化，并将氨水及乙酸乙酯上清液倒入锥形容量瓶，加入5 mL的正己烷涡旋30 s，在处理后将上层部分过滤，向其中添加正己烷溶液，从而继续离心处理，等待的进一步检测。

对色谱条件进行优化，色谱柱规格为2.1 mm×50 mm，1.8 μm，流动相中甲醇与水的比例为70∶30.色谱柱温度控制在40 ℃，样本进入量为10 μL，流动速度控制在0.2 mL/min。

对质谱条件进行优化，干燥气的质量控制在9 μL /min，干燥温度控制在350 ℃，喷雾气体的压力控制在35 psi，MRM的相关参数见表1。

2 结果

2.1 前处理方法

氟苯尼考融水能力差，采取有机溶液对样本进行提取，查阅相关研究[1]发现，可利用乙酸乙酯进行提取。氟苯尼考的化学结构与氟苯尼考胺较为相似，可通过碱化乙酸乙酯进行提取，均质提取耗时较短，具有较高的回收率。在均质过程中洗涤刀头的乙酸乙酯溶液能作为第二次提取液，避免样本的肆意浪费，也能提升回收率。经过旋转蒸发后，分别加入1、3、5 mL的水，但1 mL水的溶解效率低下，3、5 mL的回收率类似，可采取3 mL水的方式降低氟苯尼考胺的检出限。

2.2 色谱及质谱条件的优化

氟苯尼考胺是碱性物质，在C18色谱柱上容易脱落，选择Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱，该色谱柱能满足碱性物质的检测需求，并保证理想的峰形。在本次检测过程中，将流动相甲醇-水作为优化对象，氟苯尼考具有较强的保留性能，氟苯尼考胺保留能力相对较弱，60 s内便可出峰形，在检测过程中流速控制在0.2 mL/min即可，有利于延长保留时间。在检测过程中为区分杂质，避免反复实验，甲醇与水的比例可控制在70∶30，这种比例能保持良好的分离度。5 min时杂质部分流出，避免对后续检测的样本造成影响[2]。

氟苯尼考质谱条件较为成熟，在定性离子及负模式电喷雾离子源下能展开检测。氟苯尼考胺中含有一定量的NH2，选择ESI+离子扫描模式，并分析氟苯尼考胺的结构，提取m/z 230、m/z130作为定性离子，最大值为230m/z，能避免杂质的影响。氟苯尼考胺先出峰，D5-氯霉素最后出峰，ESI-模式调整为负模式，从而在氟苯尼考胺出峰前利用切换阀对色谱柱进行急性调节，开启废液阀，进一步缩小杂质的干扰影响[3]。

2.3 标准曲线

对氟苯尼考及氟苯尼考胺系列标准溶液进行检测，其浓度范围分别为0.5～45 μg/L、2～50 μg/L，结合同位素标准测试方法，得到的曲线为：氟苯尼考曲线y=1.854 1x-0.008 3（r=0.985 4）；氟苯尼考胺曲线方程为y=1.325 4x+0.111 2（r=0.956 5）。

2.4 回收率及精密度

在鸡肉中加入不同质量的混合标准液体，经过15 min的静置，并展开相应的回收试验，每项操作6次，对精密度进行计算，见表2。

自上表中能观察到，氟苯尼考及氟苯尼考胺回收率处于87.1%～110.3%范围，RSD处于1.2%～6.1%范围，根据3倍信噪比进行处理，氟苯尼考及氟苯尼考胺检出限是1 μg/kg及5 μg/kg。

3 讨论

在肉类食品氟苯尼考及氟苯尼考胺检测过程中，通过液相色谱串联质谱法检测，具有较高的灵敏度及准确度，检出限较低，具有良好的应用价值。在本次实验过程中，采取的检测方法较为快捷，有效率较高，能进行重复检测，可同时对氟苯尼考及氟苯尼考胺进行测定，在大产量检测中具有应用价值。

参考文献

[1]王君.养殖场牛肉样品中氟苯尼考以及氟苯尼考胺的残留检测分析[J].农家科技，2015（S1）：66.

[2]张守明.高效液相色谱法检测猪肉中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的残留[D].吉林：吉林大学，2017.

[3]李莹莹，宋永青，赵榕，等.液质联用检测鱼肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺的残留量[J].食品科学，2019， 31（12）：219-222.