miRNA-181a-5p对人口腔癌细胞CAL27生物学行为的影响

宋静，营秀，吴丹凤，李瑞华

(蚌埠医学院口腔医学院，安徽 蚌埠 233030)

恶性肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病之一，口腔癌是头颈部恶性癌的一种，其中90%是口腔鳞状细胞癌，其致死率高，并且其治疗常伴有功能缺陷和毁容[1]。微小RNA(microRNA，miRNA)近来受到了人们的关注。microRNAs是一类长18～24 nt的小分子非编码RNA，它能够介导基因的表达，调控转录水平，进而影响miRNA的翻译过程。最近研究表明，miRNA对基因表达的调控在多种细胞过程中发挥作用[2]。miRNA-181a-5p作为miRNAs家族成员之一，是近年来新发现的一类具有肿瘤抑制作用的miRNA，可以靶向作用于多个肿瘤相关基因，参与肿瘤的生长、侵袭、转移等[3]。但是miRNA-181a-5p在口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭过程中发挥的作用及相应机制尚不清楚。本研究选择口腔癌细胞CAL27为模型，通过转染 miRNA-181a-5p mimic增加口腔癌细胞miRNA-181a-5p的表达水平，以探讨miRNA-181a-5p与口腔癌细胞CAL27增殖、侵袭和迁移生物学特性的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 人口腔黏膜角化细胞(human oral keratinocytes，HOK)和口腔癌细胞CAL27均购自中国科学院上海细胞生物所。

1.1.2 试剂 转染试剂Lipofectamine2000和miRNA-181a-5p mimic(购自上海吉玛制药技术有限公司)、胎牛血清(购自杭州四季青公司)、RPMI1640培养基(购自Hyclone公司)、CCK-8检测试剂盒(购自碧云天公司)、结晶紫染液(购自武汉阿斯本生物技术公司)、DMSO(购自美国Sigma公司)、Transwell侵袭小室(购自美国Corning公司)、Matrigel(购自BD公司)、Trizol试剂(购自Invitrogen公司)、逆转录(RT)试剂盒(购自Toyobo公司)、PCR试剂盒(购自Fermentas公司)、Bulge-LoopTM miRNA定量聚合酶链反应(PCR)引物试剂盒(购自武汉金开瑞生物工程有限公司)。

1.1.3 仪器 恒温培养箱(美国热电公司)；酶标检测仪(Diatek公司)；……