JSRV-env慢病毒过表达载体构建及其对NIH3T3细胞增殖的影响

杨 惠 刘淑英

(内蒙古农业大学 兽医学院/基础兽医学重点实验室/农业农村部动物临床诊疗技术重点实验室，呼和浩特 010018)

绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonary adenocarcinoma，OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus，JSRV)引起的绵羊可传播性肺脏肿瘤[1]，目前在全球范围内广泛流行并严重制约了绵羊产业的发展[2]。OPA 作为一种混合型腺癌，与人肺腺癌之间的组织学相似性使 OPA 成为进一步了解人肺腺癌的有效模型[3]。JSRV 的致瘤作用主要取决于活跃的癌基因——囊膜基因(env)[4]。

为了解JSRV致病机理，大量试验通过构建动物模型，如羔羊JSRV-env感染模型、小鼠JSRV-env肿瘤模型等，探讨JSRV-env引起病理组织结构改变、信号通路激活等问题[2]。但从分子病理学角度出发，为进一步研究JSRV-env致病分子机制，大量试验构建JSRV-env体外转染细胞系，通过JSRV-env过表达质粒转染体外细胞，探讨JSRV-env引起细胞转化的分子致病基础[3]。由于在自然感染状态下JSRV仅引起绵羊细支气管上皮细胞及Ⅱ型肺泡上皮细胞发生转化，因此需要在体外细胞试验中构建大量JSRV-env体外转染细胞系，寻找不同细胞类型中JSRV-env诱导的分子变化共性，区分JSRV-env在不同类型细胞中介导的分子变化差异，最终确定JSRV-env致病的关键靶向因子[4-6]。体外细胞试验证实，JSRV-env能够诱导多种类型的细胞发生增殖[5-8]。Alla等[5]研究绵羊支气管上皮细胞时发现JSRV-env作用于受体Hayl2，进一步激活RON信号通路引发细胞增殖能力上调。Varela等[6]研究JSRV-env作用于人支气管上皮细胞(BEAS-2B)，同样发现JSRV-env依赖Hayl2受体介导细胞增殖。也有与之不同的研究报道，Johnson等[7]研究发现，JSRVenv在犬肾细胞(Madin-darby canine kidney)中不依赖 Hayl2 受体激活 PI3K-Akt-mTOR 以及 H/N-Ras-MEK-MAPK 信号通路介导细胞转化及细胞增殖；……