不同保存方法和时间对24 h 尿蛋白检测结果的影响

王素琴，翁责茗，夏伊莉，戴张峤，邱彬，章家青

（宁海县第一医院a.体检中心；b.泌尿外科；c.急诊科；d.肾内科；e.检验科，浙江 宁海315600）

研究表明随机尿的蛋白浓度检测结果不可靠[1]，目前在临床上检测24 h 尿蛋白对肾脏疾病诊断、治疗和预后有着极其重要的意义[2-5]。 由于尿蛋白排出量不恒定，且理化性质不稳定，因此选择正确的留取及存储标本显得尤为重要。 存储方法一般有冷藏法和化学防腐剂法，然而在实际存储24 h 尿标本过程中，应用起来都不方便，且防腐剂均具有一定的腐蚀性和致癌性。 另外，有人认为留取24 h 尿液对于疾病监测而言并不便利[6]，所以，经济、方便、无害的尿液保鲜存储法对慢性肾脏病的早期诊断和疗效观察显得尤为重要。本研究通过用麝香草酚化学防腐法、2～8℃冷藏法、CO2物理保鲜法和常温保存法保存尿标本，尿液采取后放置24 h、48 h、72 h、96 h、192 h、384 h 时检测尿蛋白浓度， 对同一患者的检测结果进行比较， 为临床寻找一种更合适的尿液存储方法和保存期限提供科学依据， 避免门诊病人由于多种不便利造成尿标本送检时间的滞后， 从而延误诊断和治疗[5]。

1 材料和方法

1.1 标本来源 选取2018 年5 月15 日—8 月22日在宁海县第一医院肾内科和内分泌科住院并行24 h 尿蛋白定量检测患者的24 h 尿液标本共109例，其中男性56 例，女性53 例，年龄（62.16±13.40）岁。

1.2 实验材料 仪器为日立全自动生化分析仪（008AS）， 试剂是美康生物科技股份有限公司生产的脑脊液与尿总蛋白检测试剂盒 （产品批号：17080901；180127101），麝香草酚是国药集团化学试剂有限公司生产的 （产品批号：20161110）， 医用CO2，便携式气体检测仪（深圳市普利通电子科技有限公司），冷藏冰箱。

1.3 方法

1.3.1 标本留取 嘱研究对象留取24 h 尿液， 收集后予以充分混匀，分装置21 根试管中密封保存，其中1 管即时（24 h）进行24 h 尿蛋白检测；5 管加入麝香草酚（每100 mL 尿液加0.1 g）后保存于室温（昼夜温差15～37℃）内，简称防腐剂保存；5 管充满CO2气体，并测量CO2浓度为10%以上后保存于室温（昼夜温差15～37℃）内，简称CO2保存；5 管保存于冷藏冰箱（2～8℃）内，简称冷藏保存；5 管不做任何处理保存于室温（昼夜温差15～37℃）内，简称常温保存。

1.3.2 检测方法分别对收集到24 h 尿标本和4种保存法的尿标本于24 h、48 h、72 h、96 h、192 h、384 h 时进行尿蛋白浓度检测。

1.4 统计学方法统计软件采用SAS 10.1，计量资料分析采用±S 表示，两组间均数比较采用配对样本t 检验，多组间均数比较采用方差分析，其中，重复测量数据多组间均数比较采用重复测量方差分析，组间两两比较采用LSD 法。 P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 同种存储方法下不同时间点尿蛋白浓度比较重复测量数据方差分析结果显示，尿蛋白浓度4组保存方法比较差异无统计学意义（F组间=0.025，P=0.995），不同时间点尿蛋白浓度比较差异有统计学意义（F时间=4.867，P＜0.05），时间与组间不存在交互作用（F交互=1.286，P=0.203）。 进一步单独效应分析，仅CO2保存组不同时间点尿蛋白浓度差异具有统计学意义（FCO2=2.630，P=0.029），其他保存方法不同时间点尿蛋白浓度差异均无统计学意义，说明长时间保存时，冷藏保存、常温保存和防腐剂保存优于CO2保存，详见表1。 由于研究目的为时间对尿蛋白浓度的影响，可认定为尿蛋白浓度24 h测量数据为基准数据，进一步对不同时间点分别与基准测量数据进行比较，结果显示，CO2保存方法192 h 和384 h 与基准测量数据差异均具有统计学意义（t=2.167、3.053，P=0.033、0.003）。 说明如果尿标本保存96 h 内可选用CO2保存方法，一旦保存时间超过192 h 时不宜选用CO2保存方法。 如果保存时间不超过384 h 时，可选用冷藏保存、防腐剂保存和常温保存。

表1 尿蛋白浓度不同保存方法下不同时间点测量值比较（±S，mg/L）

表1 尿蛋白浓度不同保存方法下不同时间点测量值比较（±S，mg/L）

注：#表示主效应，*表示交互效应

?

3 讨论

3.1 检测24 h 尿蛋白浓度时，尿液标本可不用防腐剂、冷藏和CO2保存方法，用常温保存法即可，保存时间不宜超过384 h 李艳、薛雄燕、冯绮玲、邓敬仪等[7-10]研究表明，防腐剂对24 h 尿蛋白定量检测结果有影响,王修全、杨柳等[11-12]研究表明，尿液在常温条件下保存24 h， 尿蛋白定量检测结果显著升高。本研究探讨了同一患者的尿标本分别用麝香草酚化学防腐法、 冷藏法、CO2物理保鲜法和常温保存法保存，尿蛋白浓度4 组保存方法比较差异无统计学意义（F组间=0.025，P=0.995），再对其不同时间尿蛋白检测结果进行比较， 结果提示，4 种保存法保存尿标本96 h 前， 尿蛋白浓度检测结果与基准测量结果比较差异均无统计学意义， 说明防腐剂、冷藏法、CO2物理保鲜法和常温条件下保存96 h 对尿蛋白定量检测结果没有影响， 这与国内黄燕青[13]、刘倩等[14]、胡金川等[15]研究结果相似。 Feres 等[16]研究也表明，无论尿液中是否添加防腐剂，尿蛋白以及微量白蛋白的检测结果与即时测定结果比较，均无明显变化。

3.2 检测24 h 尿蛋白浓度时，用常温保存法保存时间不宜超过384 h Lo 等[17]发现通过CO2的处理，可以抑制原奶中的细菌繁殖， 从而延长原奶的保存时间；Yang 等[18]研究表明CO2气调法贮藏，可以延长冷藏牛排的保质时间；李浪花等[19]介绍了CO2在乳制品及农产品保鲜中的技术应用和研究进展； 张燕等[20]对气调贮藏对松茸保鲜品质的影响进行了研究； 然而都未涉及到CO2气调法贮藏对尿标本保鲜的相关研究。以往有针对保存24 h 时间点进行尿蛋白总量对比分析的研究[15,21-23]，但缺少对最佳存储期限的探讨。本研究探讨了用麝香草酚化学防腐法、冷藏法、CO2物理保鲜法和常温保存法保存尿标本，在放置24 h、48 h、72 h、96 h、192 h、384 h 后， 分别检测尿蛋白浓度， 并对同一患者检测结果前后进行比较，统计分析4 种保存方法存储尿标本的时间对检测结果的影响， 并确定最佳保存方法和存储期限。本研究发现CO2保存在192 h 和384 h 时间点与基准测量比较时差异均具有统计学意义， 而其他保存方法各时间点尿蛋白浓度差异均无统计学意义（见表1）。 本研究结果提示，检测24 h 尿蛋白浓度时， 尿液标本可不用防腐剂、 冷藏和CO2保存方法， 在室温下放阴凉处即可， 但保存时间不宜超过384 h。

3.3 研究的局限性 由于本次研究尿标本保存96 h后时间跨度较大， 因此不能确切得出CO2保存具体时长。另外，本次研究只涉及到CO2在保存尿液标本中的应用，但笔者通过阅读文献发现，CO2的保鲜效果的影响因素包括氧气分压、CO2分压、 储存材料、温度、湿度等[17-20，24-25]，本次研究均未涉及。 关于CO2保鲜效果的影响因素，在尿液标本保鲜中的具体运用以及存在的相关问题有待进一步研究。

[致谢]感谢沈阳医学院的黄启风老师对本文统计学数据的指导和把关。