尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白化学发光检测方法的建立及性能评价

李奎，刘啸林，于林，李双法，丁蒙蒙，刘珂，付光宇(.郑州安图生物工程股份有限公司，郑州 45006；.河南大学生命科学学院，河南开封47500)

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)作为一种新型敏感的肾损伤标志物备受关注[1]。正常情况下，NGAL由肾脏少量表达，在肾脏损伤前期，肾小球缺血2 h内显著升高[2]。研究表明，尿NGAL比血、尿肌酐更能特异性地反映急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)的损伤程度[3]。NGAL可以作为AKI早期诊断的一个敏感指标[4]。

目前NGAL的检测方法主要有化学发光法、免疫比浊法、ELISA等，如美国Abbott化学发光法、丹麦BioPorto比浊法及美国R&D System的ELISA法等[5]。Kift等[6]研究显示，化学发光法与比浊法具有比ELISA方法更宽的检测范围和灵敏度。另有研究报道，不同方法学NGAL参考范围及其AKI判断临界值各不相同，差异较大[7-9]。本实验采用化学发光法定量检测人尿液中NGAL的含量，为AKI的诊断和患者治疗监测提供辅助手段。

1 材料与方法

1.1标本来源及处理 收集2019年3至7月河南省人民医院住院患者尿液标本204份，另收集203份同期健康者尿液标本。尿液标本400×g离心5 min，取上清液于-20 ℃保存备用。

1.2主要仪器与试剂 AutoLumo A2000 plus全自动化学发光测定仪(郑州安图生物公司)，ARCHITECTi2000SR全自动免疫分析仪(美国Abbott 公司)；尿NGAL测定试剂盒(化学发光微粒子免疫检测法，批号89159U100，美国Abbott 公司)，小鼠抗人NGAL单克隆抗体(克隆号5A6、2H5)、NGAL天然纯化抗原、辣根过氧化物酶(郑州伊美诺公司)，发光底物A(鲁米诺)、发光底物B(H2O2)(郑州安图生物公司)，磁珠(粒径1.0 μm，粒径变异系数<5%，JSR Life Sciences公司)，牛血清清蛋白(BSA，Sigma公司)。

1.3方法

1.3.1小鼠抗人NGAL单克隆抗体酶结合物的制备 用过碘酸钠法对小鼠抗人NGAL单克隆抗体进行辣根过氧化物酶标记，并通过半饱和硫酸铵法纯化、透析，按体积比1∶1加入50%甘油混匀，于-20 ℃保存。……