鸡豆黄素A对MPP+诱导PC12细胞凋亡的保护作用

俞益桂，薛海霞，韩俊辉，尹艳艳

帕金森病(parkinson's disease，PD)是世界第二大神经退行性疾病，临床症状主要包括静态震颤、运动迟缓和僵硬肌肉，其病理学特征为黑质(substantia nigra, SN)多巴胺(dopamine，DA)能神经元的凋亡和丧失[1-2]。研究[3]表明在PD疾病中，长期或严重的氧化应激可以诱导DA能神经元受到损伤甚至凋亡。相关研究[4]发现在细胞凋亡中活性氧(reactive oxygen species,ROS)-NO通路起到了至关重要作用，说明凋亡的启动与ROS是密不可分的。含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase, Caspase)家族的激活一般被认为是细胞凋亡的重要一环，Caspase-9被凋亡相关因子诱导形成凋亡小体，而凋亡小体随即激活凋亡执行者Caspase-3，而Caspase-3在很多凋亡信号的传导过程中发挥重要作用[5]。鸡豆黄素A(biochanin A，Bioch A)是从鹰嘴豆等豆科植物中提取分离的异黄酮类有机化合物，是一种天然的植物雌激素，该课题组前期实验表明Bioch A对DA能神经元发挥保护作用与其对小胶质细胞活化，炎症相关因子分泌和氧化应激等的抑制有关[6-7]。然而，Bioch A能否直接保护神经元尚待进一步研究。该文通过1-甲基-4-苯基吡啶离子 (1-methyl-4-phenylpyridinium, MPP+)损伤PC12细胞来建立体外模型，研究Bioch A能否通过抗氧化作用而发挥神经元保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞株 从中国医学科学院协和医科大学基础细胞中心细胞室获得大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞(pheochromocytoma cell, PC12)株。

1.1.2药品与试剂 FBS和高糖DMEM完全培养基购自美国Gibco公司；MTT、Bioch A、PI、雌二醇(Estrodiol)和DMSO购自美国Sigma-Aldrich公司；青-链霉素混合溶液、胰蛋白酶(Trypsin)、ROS检测试剂盒(DCFH-DA荧光探针法)、RIPA裂解液(弱)、BCA蛋白浓度测定试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；……