核固红染液不同配制方法对含铁血黄素染色的影响

李 莉，梁永波，陈 玲，刘玲玲，齐 华

含铁血黄素染色是病理诊断技术中常用的方法。组织内有出血时红细胞被吞噬细胞吞噬，血红蛋白在吞噬细胞中的溶酶体内降解后形成棕黄色颗粒，即含铁血黄素[1]。现阶段在很多疾病的检测中均采用含铁血黄素检测。含铁血黄素细胞是特发性肺含铁血黄素沉着症诊断的特异性指标[2]，有文献对含铁血黄素染色技术进行改良[3]。根据文献报道配制1%核固红染液[4]，核固红溶解性较差，放置一段时间后无法染色。因此，作者对该方法进行改进，应用不同的配制方法，减少了核固红的用量，使核固红染色液稳定，染色亮丽，结果可靠，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料亚铁氰化钾、核固红、硫酸铝钾、冰乙酸、二甲苯、无水乙醇等均购于国药集团化学试剂公司；盐酸购于洛阳昊华化学试剂公司；含铁血黄素试剂盒购于珠海贝索公司；Leica RM2245切片机、Leica HI1210捞片机、Leica HI1220烤片机；宁波舜宇EX31光学显微镜；永鑫科教通风厨；上海上平分析天平等。

1.2 方法2%亚铁氰化钾：称量2 g亚铁氰化钾溶于100 mL纯化水中，过滤后，避光4 ℃保存；2%盐酸：2 mL浓盐酸加入98 mL纯化水中，过滤后室温保存。染色步骤：切片常规脱蜡至水；亚铁氰化钾与盐酸邻用前1 ∶1混合后滴于组织上染色20 min；切片水洗，核固红8 min；水洗后，梯度乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。

2 结果

2.1 1%核固红染液染色根据相关资料配制1%核固红染色液，对肾组织进行染色，初配时染色正常(图1)，染色亮丽。染液放置1周后再次进行染色时，发现核固红染色能力严重下降。组织只能染出蓝色，红色几乎不显示，出现核固红不能染色的情况。

ABCD

2.2 染色液配方调整后染色对核固红染液的配制方法进行调整，共6个配方(表1)。按照表1中的不同配方进行配置后对肾组织切片进行染色，并以Baso含铁血黄素染色试剂作为对照进行染色。

不同核固红配方染出的红色效果差异较大，0.1%核固红+1%冰乙酸(配方3)和0.1%核固红+2%冰乙酸(配方4)核固红染色强度减弱，镜下观察困难。1%核固红+1%冰乙酸+1%乙醇组(配方6)，核固红染色强度明显增强，但染色出现定位问题，胞核和胞质均为红色，界限不清，使观察难度增加。0.1%核固红+1%硫酸铝钾(配方1)、0.1%核固红+5%硫酸铝钾(配方2)、1%核固红+5%硫酸铝钾组(配方6)核固红染色胞核和胞质染色清晰，其中0.1%核固红+5%硫酸铝钾组染色效果优于其他组。不同核固红配方，不影响含铁血黄素(蓝色)的染色，这可能主要是由于含铁血黄素和酸性亚铁氰化钾发生反应(图2)。

ABCDEFG图2 肾组织切片不同核固红配方染色:A.Baso染色;B.配方1,染色正常;C.配方2,染色正常;D.配方3,染色强度减弱;E.配方4,染色强度减弱;F.配方5,染色正常;G.配方6,染色特异性差

表1 核固红染色液的配制方法

3 讨论

当组织切片中出现黄棕色色素时，为了鉴别色素的种类，可以使用含铁血黄素染色法。核固红染色与其他染色联用，可以更好的显示组织结构，有文献报道核固红和苯胺蓝联用对肾组织切片进行染色，能更好的显示肾脏的组织结构[5]；改良的劳克坚牢蓝和核固红染色对髓鞘染色效果较理想[6]。

有文献表明使用微波加热来减短含铁血黄素的染色时间[7]，但很少有文献研究核固红的配制与染色方法。本实验通过核固红染色液不同的配制方法来观察核固红的染色效果，发现0.1%核固红+1%硫酸铝钾、0.1%核固红+5%硫酸铝钾、1%核固红+5%硫酸铝钾组核固红染色胞核和胞质染色清晰，核固红染色亮丽，与对照组Baso染色效果相当。其中0.1%核固红+5%硫酸铝钾染色优于其他组，核固红染料浓度为0.1%，核固红用量较少时便达到较好的染色效果，降低了染料的配制成本。