桔梗中β-D-葡萄糖苷酶的提取研究

朱学军*，黄晓巍 ，王 昊，梁 静，王 虹

(1.吉林农业大学生命科学学院，长春130118；2.长春中医药大学药学院，长春130118）

桔梗（Platycodon grandiflorus）是桔梗科植物桔梗的干燥根，是传统中药常用药，具有止咳，平喘，排脓等功效。研究人员采用现代分析技术对桔梗中小分子进行了分析研究，发现桔梗中主要活性成分为三萜类和黄酮类物质[1-3]。

β-D-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.21)属于水解酶类，又称β-D-葡萄糖苷葡萄糖水解酶，是一类生物大分子，能够水解结合于末端非还原性的β-D-葡萄糖苷键。广泛存在于植物、微生物和动物细胞中[4-8]。因此本文以桔梗为原料，以对硝基苯-β-D-葡萄糖为底物，测定在提取过程中酶活力的变化，对桔梗中β-D-葡萄糖苷酶提取主要影响因素进行探索，为中药药物在生物大分子方面的研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 原料

桔梗（市售，新鲜桔梗室温通风干燥，粉碎，过40目筛，备用）。

1.1.2 试剂

对硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside,pNPG)，上海旭硕生物科技有限公司；对硝基苯酚（PNP），分析纯，天津市鑫铂特化工有限公司；其他试剂均为分析纯。

1.1.3 仪器

L5S紫外可见分光光度计，上海仪电分析仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 酶活力测定方法

粗酶液的制备：在一定条件下，将桔梗粉末加入适量稀盐溶液浸提一段时间后，用定量滤纸进行过滤，收集滤液，即为粗酶液。

测定方法[5-7,9]：吸取粗酶液0.1 mL加入0.5 mL pH4.5缓冲液中，于37℃恒温水浴预热5 min，再加入已预热的5 mmol/L pNPG 0.4 mL，精确计时30 min，迅速放入沸水中水浴5 min，流水冷却至室温，吸取0.5 mL反应液加入1 mol/L Na2CO3溶液中，混匀，室温放置5 min，于405 nm处测OD值。

空白对照管中加入0.1 mL沸水处理使酶失活，按上述操作。……