寻常型天疱疮22例及大疱性类天疱疮13例白细胞介素-29水平检测分析

曹 凯，陈 涛，付丽新

寻常型天疱疮（pemphigus vulgaris，PV）、大疱性类天疱疮（bullous pemphigoid，BP）均属大疱性皮肤病，在发病机制上除了已经明确的抗原抗体反应外，还涉及细胞免疫、补体系统、固有免疫等方面[1]。2003年首次发现白细胞介素（IL）-29，它是IL-10家族中的一种细胞因子。国内外研究发现，IL-29与类风湿关节炎[2]、系统性红斑狼疮[3]、系统性硬化[4]、过敏性紫癜[5]、银屑病[6]、骨关节炎[7]等发病有关。笔者采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测PV、BP患者血清IL-29水平，并探讨IL-29与PV和BP发病的关系，其发病机制在生物学中的作用。

1 资料与方法

1.1 资料

1.1.1 病例资料 选取2017年12月－2018年6月就诊于成都市第二人民医院皮肤科门诊及住院部的患者。纳入标准：经过临床表现、组织病理和直接免疫荧光检查，最终确诊的PV、BP患者。排除标准：①患有肿瘤；②其他自身免疫性疾病；③急性感染的患者。共收集PV患者22例，男10例，女12例，年龄28～88岁，平均（54.45±14.78）岁；BP患者13例，男11例，女2例，年龄38～84岁，平均（69.64±12.87）岁。本院同期健康体检部正常人健康对照组14例，男7例，女7例，年龄18～78岁，平均（39.64±19.16）岁。

1.1.2 试剂与仪器 IL-29 ELISA试剂盒（博士德EK0964），酶标仪（BIO-RAD 680）。

1.2 方法

1.2.1 血清IL-29检测 抽取所研究对象外周血 5 ml，肝素钠抗凝，低温离心后取血清保存于-70℃冻存。待标本收齐后，用ELISA法检测标本IL-29的表达水平，步骤严格按照说明书进行。

1.2.2 观察指标 观察PV、BP患者血清标本通过ELISA法所测得的IL-29浓度。

1.3 统计学方法

所有数据均采用SPSS19.0统计软件进行处理。PV组、BP组、健康对照组分别经正态性检验，P＜0.05，不符合正态分布，故选用非参数检验-Wilcoxon秩和检验法。计量资料以均数±标准差表示，PV、BP组分别与健康对照组比较，PV与BP组比较，检验水准α=0.05。

2 结果

PV组与健康对照组比较，IL-29水平显著升高（u=45，P＜0.0001），差异有统计学意义；BP组与健康对照组比较，IL-29水平显著升高（u=16，P＜0.0001），差异有统计学意义；PV组与BP组比较（u=93，P＞0.05），差异无统计学意义（表1）。

表1 3组患者血清IL-29水平比较 （x¯ ±s）

3 讨论

PV是一种表皮内棘层松解性大疱性自身免疫性皮肤病，其基本发病机制为Dsg1、Dsg3导致角质形成细胞失去细胞间的黏附。除自身抗体外，细胞因子和炎症递质可能参与天疱疮的水疱形成，包括FasL、肿瘤坏死因子-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-17、IL-22、IL-35等[8-11]。BP表现为表皮下紧张性大疱，其基本发病机制为BP抗原（bullous pemphigoid antigen，BPAG）导致细胞膜半桥粒和锚丝等断裂及消失[12]。此外，角质形成细胞可能独立于补体吸引中性粒细胞，通过与BP-IgG/E结合，分泌IL-6和IL-8，诱发水疱的形成[11]。

IL-29属于III型干扰素（IFN），也称为IFN-λ1。在受到某些病毒感染或者细菌及其分泌物刺激时，有核细胞均可低水平产生IL-29。单核细胞来源的成熟树突状细胞[13]、肥大细胞[14]、Th17细胞[15]均可高表达产生IL-29。IL-29的生物学作用主要为抗病毒[16]、抗肿瘤[17]、免疫调节活性[18]和通过诱导效应改变细胞前类型[19]等。IL-29在炎症、变态反应性皮肤病中，如银屑病[15]、慢性自发性荨麻疹[20]等发挥着重要的抗炎、调节免疫的作用。

笔者的研究结果显示，PV组和BP组分别与健康对照组相比，IL-29水平显著升高，其具体机制不明。Wolk等[15]关于IL-29与银屑病的相关研究表明IL-29在表皮中高表达，主要影响角质形成细胞，IL-29上调病毒和微生物传感细胞受体的表达，包括Toll样受体2、Toll样受体3和黑素瘤分化相关基因5。在未感染的皮肤中，IL-29增强角质形成细胞与病毒和微生物产物反应的能力，并间接地上调抗炎潜能和先天免疫[13]。PV、BP与银屑病同属炎症性皮肤病，由此推测IL-29在PV和BP患者血清升高的原因为IL-29参与了抗炎及免疫调节过程。

笔者的研究结果显示，PV组与BP组IL-29检测水平相比较差异无统计学意义，而角质形成细胞均参与PV、BP的发病机制[11]。由此推测，本文的研究结果和既往IL-29与炎症性皮肤病实验研究[15,20]结果相吻合，即IL-29影响角质形成细胞，参与了抗炎反应。

目前临床上治疗PV常用的生物制剂包括静脉滴注免疫球蛋白、抗CD20单克隆抗体、肿瘤坏死因子抑制剂、T淋巴细胞免疫疗法等。近年来，利妥昔单抗（rituximab，RTX）与糖皮质激素被推荐为PV的一线治疗药物[21]。RTX是一种以B淋巴细胞表面的CD20抗原为靶点的单克隆抗体, 通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用、补体依赖的细胞毒作用以及诱导细胞凋亡使B淋巴细胞清除[22]。Ahmed和Shetty[23]等分析了500例使用RTX治疗的顽固性PV患者，在使用不到6周内，有90%～95%的患者临床缓解。临床缓解期后，有5例患者出现严重不良事件，最重要的是感染并发败血症，与RTX有关的死亡为2例。RTX是目前可用于治疗顽固性天疱疮的最佳生物制剂之一。虽然RTX疗效显著，但缺乏大型、多中心随机对照试验，其安全性有待提高。此外，一些其他生物制剂，如BAFF、P13K、BTK抑制剂，逐渐在大疱性皮肤病治疗中使用[24]。因此，针对不同治疗靶点的新型生物制剂亟待研究。

综上，笔者的检测发现PV和BP患者的血清IL-29水平较健康对照组显著升高，目前国内外鲜见PV、BP患者血清IL-29水平及其机制的相关研究报道。虽纳入本研究的患者排除了急性感染，但是否存在潜在微小感染还不能排除，因此IL-29是否也同时参与了抗感染过程尚不能除外。受限于本研究收集的病例数过少，部分为已经治疗的患者，仅对患者血清水平的分析，并未对皮损、疱液中的IL-29进行分析，并不能阐明IL-29与PV和BP的具体发病机制。IL-29可能参与了PV、BP的发病过程，在PV、BP中的生物学作用可能表现为抗炎、免疫调节，存在潜在的靶向治疗方向，需后续进一步研究。