苦参碱脂质体凝胶的含量测定

程明刚，肖若蕾，袁侣明，程梦玲，余海峰

(湖北科技学院药学院，湖北 咸宁 437100)

苦参碱是清热燥湿药——苦参的主要成分，有广谱抗菌作用[1]。含苦参制剂可治疗湿疹[2]、银屑病[3]等皮肤病。目前临床上治疗皮肤病常用的剂型有洗剂、乳剂、软膏剂、酊剂[4]等。这些传统型的剂型在使用时存在一定不足：洗剂、酊剂为液体制剂，容易流失，作用时间短；软膏剂为半固体制剂，使用不恰当会污染衣服，有的还会妨碍皮肤的正常功能等。这些会极大程度上影响其使用。

脂质体是一种定向药物载体，具有类细胞结构[5]，有较强的组织相容性和细胞亲和性，并且可以降低药物的毒副性和提高药物的稳定性。凝胶剂可根据需求涂展在用药部位。将脂质体和凝胶结合，能延长药物作用时间，提高疗效[6]。参考相关文献[7]制备出苦参碱脂质体凝胶，本文对其含量进行了测定，为下一步的研究提供参考。

1 资料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 试剂

苦参碱(上海源叶生物科技有限公司，含量≥98%)，苦参碱对照品(含量99.5%，中检所，批号：110805-200508)，卡波姆940(上海源叶生物科技有限公司，分析纯)，无水乙醇(国药集团，分析纯)，卵磷脂、胆固醇(国药集团，生化试剂)，乙腈、甲醇(国药集团，色谱纯)

1.1．2 仪器

FA2104型电子分析天平(上海天平仪器厂)，KQ100型超声波清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司)，高效液相色谱仪(清华科技)，L6型紫外分光光度计(上海贤德实验仪器有限公司)，XD-3000型旋转蒸发仪(上海贤德实验仪器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 苦参碱脂质体凝胶的制备

取处方量的卵磷脂与胆固醇于烧杯中，加入15mL无水乙醇，超声溶解；在旋转蒸发仪上45℃，转速5级除去无水乙醇，卵磷脂与胆固醇在瓶壁上形成透明均匀薄膜；另取适量的苦参碱，加pH4.5磷酸缓冲溶液30mL，超声溶解后转入旋转蒸发仪中，40℃充分水化，然后超声溶解，得到乳白色偏黄的苦参碱脂质体混悬液。取一定量苦参碱脂质体混悬溶液，加入适量卡波姆940，在室温下放置24h，使其充分膨胀，得到淡黄色的苦参碱脂质体凝胶。

1.2.2 空白脂质体凝胶的制备

按“苦参碱脂质体凝胶”的制备方法，制备不含苦参碱的脂质体凝胶。

1.2.3 溶液的制备

(1)对照品溶液的制备。精密称取10.0mg苦参碱对照品于100mL容量瓶中，加入适量甲醇超声溶解，继续加入甲醇稀释至刻度，得到0.10mg/mL的苦参碱对照品溶液。

(2)样品溶液的制备。精密称取苦参碱脂质体凝胶1.0g，加甲醇至50mL，超声25min，过0.45m微孔滤膜，测定苦参碱的含量。

(3)空白溶液的制备。精密称取不含苦参碱的脂质体凝胶1.0g，按“样品溶液的制备”方法制备空白溶液。

2 结 果

2.1 波长的选择

使用紫外分光光度计对其波长在200～400nm之间进行扫描。如图1所示，在212nm处有最大波长。

图1 苦参碱对照品波长图

2.2 高效液相色谱条件

C18柱色谱柱(250mm×4．6mm，5μmol/L)，流动相(乙腈-水(9∶1))，检测波长：212nm，流速0.8mL/min，柱温：室温。

2.3 苦参碱标准曲线的建立

精密量取苦参碱对照品溶液0.1、1、2、4、6、8mL溶液各置于10mL容量瓶中，分别使用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别用0.22m微孔滤膜过滤，用进样针精密吸取20L注入液相色谱中，按上述色谱条件分析，测定的峰面积如下。见表1。

表1 不同浓度的苦参碱溶液在212nm下的峰面积

根据表格数据，以浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归，得到回归方程为y=32860x+15438，R=0.9996，表明苦参碱在浓度为1.0～80.0 g/mL的范围内，浓度与峰面积呈线性关系。

2.4 专属性试验

精密吸取对照品溶液、空白溶液、样品溶液，按上述色谱条件分别进样20L，得到以下色谱图。见图2。

苦参碱对照品HPLC图 空白脂质体HPLC图 脂质体HPLC图

如图2所示，在该色谱条件下，苦参碱对照品溶液与苦参碱的脂质体凝胶提取溶液大约在4min左右出峰，且脂质体的其他辅料不会干扰苦参碱的含量测定。

2.5 精密度试验

按上述条件，精密吸取浓度为20g/mL苦参碱对照品溶液3次，每次20 L，注入高效液相色谱仪，得到峰面积，计算RSD为0.12%。见表2。

表2 精密度试验结果

2.6 稳定性试验

精密吸取浓度为20g/mL苦参碱对照品溶液20L，分别在它们配制完后的1、2、4、6、8、12h注入HPLC中，然后测定各自峰面积，计算RSD为0.4%，结果表明苦参碱在12h内稳定。见表3。

表3 稳定性试验结果

2.7 回收率试验

精密吸取空白脂质体溶液3份，各10mL，依次加入苦参碱1.0、1.5、2.5mg，超声仪使苦参碱得到充分溶解。分别精密吸取溶液20L，注入HPLC中，测得峰面积，然后计算苦参碱含量和加样回收率，测定结果符合液相色谱测定要求。见表4。

表4 加样回收率试验结果

2.8 样品含量测定

取3个批号(20190305、20190312、20190319)的苦参碱脂质体凝胶各3份，每份1.0g，置于50mL容量瓶中，按样品溶液制备方法处理，按色谱测定条件，测其含量，结果三批样品的平均含量分别为2.48、2.61、2.57mg/g。

3 讨 论

3.1 卵磷脂和胆固醇配比的选择

在制备脂质体时，卵磷脂和胆固醇的配比对脂质体的包封率影响较大，预试验结果表明当卵磷脂与胆固醇配比为2∶1时，苦参碱包封率最高，因此，本实验所选择的的卵磷脂与胆固醇的质量比为2∶1。

3.2 样品纯度的影响

在预实验溶解样品时，苦参碱粉末总会有部分无法溶解，最开始考虑到可能是苦参碱加多了，从而使得溶液过饱和导致苦参碱无法完全溶解，当减少了苦参碱的量之后发现还是无法溶解，最终选择将原有的药品换成了现用纯度更高的药品才解决了苦参碱的溶解问题。

3.3 测定方法的选择

在苦参碱的含量测定方法中，流动性有多种[8-9]。本文主要目的是建立苦参碱脂质体凝胶剂中苦参碱的含量方法，为下一步研究提供方法学参考和依据。本文采用乙腈-水为流动相，通过线性考察、专属性实验、精密度实验、稳定性实验等方面的内容实验，发现用该方法稳定性良好、精密度高、回收率高，可作为该制剂的含量测定方法。