狂犬病诊断技术研究

郑守洁 陈炫华

（广东省湛江市畜牧技术推广站，广东湛江 524094）

狂犬病是由狂犬病病毒引起的一种人畜共患的高致死性传染病，该病的发病范围广，致死率高，对人畜的威胁很大。狂犬病是一种古老的疾病，远在公元前556年在《左传》上就有记载，那时候人们就已经认识到疯狗咬伤人后可导致发病。狂犬病毒潜伏在已经发病的犬的唾液腺内，人畜被带毒的犬咬伤后，如果没有正确处理伤口，就会感染。近年来，随着犬养殖数量的增加以及各地对犬的免疫注射开展情况的差异，导致狂犬病的疫情有所提升。本文对此病的诊断方法做了详细的阐述，以期提高诊断效率。

1 根据流行病学诊断

人和各种畜禽都对狂犬病比较易感，其中犬、狐、狼为人畜狂犬病的传染源和病毒贮存的宿主。病毒通过病畜和带毒者的唾液大量排出到外界环境中，健康的动物通过损伤或咬伤的皮肤黏膜感染发病；近年来，据研究报道，狂犬病毒也可以经呼吸道和消化道传染。此病的发生没有季节性，一年四季均可发生，每年的4～5月份，犬的性活动旺盛，发病率较高，感染后的致死率为100%。

2 根据临床症状诊断

狂犬病的潜伏期长短不一，短的为2～8周，长的可达数月或1年以上。感染后，各种动物的临床症状大体相似，一般分为狂暴型和麻痹型。

犬的狂暴型可分为三个阶段，分别为前驱期、兴奋期和麻痹期。前驱（沉郁）期一般持续0.5～2d，病犬精神沉郁，性情反常，喜欢呆在黑暗处，不愿接近人，不听呼唤，强迫牵引常会咬伤畜主，瞳孔散大，容易兴奋，望空扑咬，性欲较强，唾液的分泌量增多；兴奋（狂暴）期一般持续2～4d，病犬高度兴奋，常攻击人畜，斜视，无目的的到处乱跑，恐水，犬的狂暴与沉郁常常交替出现，随着病情的发展，咽喉麻痹，吞咽困难；麻痹期一般持续1～2d，病犬张口垂舌，口中流出含有泡沫的唾液，四肢及后驱麻痹，卧地不起，最后死亡。

犬的麻痹型表现为兴奋期很短，或者没有明显的兴奋症状就进入麻痹期。病犬因为喉头、下颌、后躯、舌咽等部位的麻痹而亡。病程很短，多为2～4d 死亡。

其他动物的狂犬病症状与犬的狂犬病非常相似，但是牛多为兴奋型，表现为反刍异常，前胃驰缓，便秘等症状，常常会被误诊为消化道疾病；病猪常出现嘶哑尖叫，躲在角落；猫也为兴奋型，喜欢接近人，行动迅速，对人的威胁较大。

3 病原学诊断

3.1 病毒分离

无菌采集病死动物的新鲜脑组织，脑干要包含在采集的脑组织混合物中，将采集到的病毒标本根据需要，采用不同的方法进行保存，常用的方法有两种，分别为低温冷冻保存和冷冻真空冻干保存。狂犬病毒的分离方法主要有两种，一种为小鼠脑内接种试验，另一种为快速组织培养感染试验，后一种方法需要的时间短，费用低，比较经济。

3.2 荧光抗体试验

荧光抗体试验是最普遍的用于诊断狂犬病的方法，这种方法是将采集的样品制成涂片，然后滴加异硫氰酸酯荧光素和狂犬病毒免疫球蛋白，干燥、冲洗后，放在荧光显微镜下观察是否存在狂犬病毒抗原。这种方法适用于新鲜病料或冷冻病料的检测，比较灵敏，迅速，准确度高，检出率高达95%以上。但是这种方法也受到很多因素的影响，如样品的性质、检测人员操作的熟练程度、荧光抗体的品质以及荧光显微镜质量等，有时会出现误判的可能。

3.3 快速酶免疫诊断

该方法也是检测狂犬病抗原的一种免疫化学实验。该检测方法简单、方便、快速，特别适用于大批量样品的流行病学调查，但需注意的是该试剂盒在运输过程中必须进行冷藏，且在实验过程中移液器、水浴箱校正时很容易出现误差造成假阴性或假阳性事件发生，因此，在操作中必须严格注意实验条件。此种方法需要脑组织为样品，也不适合动物临死前的检测。

4 血清学诊断

4.1 病毒荧光抗体中和试验

这种方法是运用梯度稀释血清中和固定量病毒的原理，来快速、安全的检测狂犬病毒。这种方法重复性好，敏感度较高，容易操作，但是比较费时间，不适合与大批量的检测。

4.2 斑点酶联免疫检测法

该方法需以微孔膜为载体，如若酶免疫反应结果为阳性，微孔膜上就会出现斑点。其具体操作步骤为制备样品、点样、滴加酶标抗体、加底物、再洗膜最后显色，该方法检测结果的准确程度受膜、封闭液、洗涤剂以及抗体结合物的影响。这种检测方法需要的时间短，灵敏，特异性强，适合于大批量样品的检测，也适合于基层单位的推广应用。

4.3 酶联免疫吸附试验

这种方法操作简单，不需要制备活病毒，对血清的品质也要求不高，需要的时间短，适合大批量样品的快速检测工作，也适用于对猫、狗接种疫苗后血清样品中的狂犬病抗体的定性检测。但是这种方法的灵敏度较低，据研究发现，当抗体保护水平在0.5 IU/cm3左右时，抗体含量的微量的变化就可以影响检测结果，导致假阳性或假阴性现象的出现。

5 结语

狂犬病是一种危害严重的人畜共患病，随着人们生活水平的提高，饲养猫、犬的数量大幅度提升，但是人们对宠物的管理水平较低，对疾病的预防意识也不强，导致流浪狗、猫的数量增加，患病的几率提升。预防狂犬病发生的关键就是加强对猫、狗等宠物的管理，定期进行预防免疫，定期进行抗体检测，及时发现和确诊疑似病例。当被猫、狗咬伤后要及时处理伤口并进行疫苗紧急接种。