新疆乌鲁木齐地区马疱疹病毒1 型、马动脉炎病毒、马流感病毒感染的血清学调查

王雪竹，加尔肯，刘建华，胡 月，孙佳琪，王旭蕾，车传忠，郑学功，贾钦瑞，祖力亚江·阿不都热合曼，冉多良

（新疆农业大学动物医学学院，新疆 乌鲁木齐 830052）

马疱疹病毒l 型（Equineherpes virus 1，EHV-l）引起马属动物呼吸系统、神经系统、孕马流产、新生马驹死亡等疾病[1-2]。1933 年Dimock 等首次在美国肯塔基州发现该病毒，至今已在50 多个国家和地区马群中流行，EHV-1 阳性率呈不断上升趋势[3]，通常在30%以上，最高可达90%[4]。马动脉炎病毒（Equine arteritis virus，EAV）引起马属动物呼吸道和生殖道疾病，病马表现发热，流脓性黏液性鼻液，眼框、躯干及生殖道水肿，妊娠母马流产[5-6]。1957年Doll 等于美国俄亥俄州的马流产胎儿中首次分离到该病毒（Bucyrus 株）[3]，我国西北、西南、东北及华南地区均有该病度的流行[7-8]。马流感病毒（Equine influenza virus，EIV）是引起马属动物重要的呼吸道疾病之一，严重时引起孕马流产，各年龄、品种和性别的马均易感[9]，自1956 年Sovinova 等从布拉格分离到甲型流感病毒后，马流感在欧洲、北美及英国等国家不断暴发[10]。近年，该病在我国东北、西北地区及日本、蒙古、印度等周边国家均有报道。这3种马传染病在全球范围呈地方流行性暴发，给马业带来重大经济损失[11]，严重的阻碍了我国马业的可持续发展。为系统的了解新疆乌鲁木齐地区这3 种马病的流行现状，本研究采集该地区具有代表性马场的676 份马血清样品，进行了EHV-1、EAV、EIV 的血清流行病学调查，并分析其流行特点和感染因素，为该地区这3 种马病的有效防控提供数据支撑。

1 材料与方法

1.1 血清、抗原及样品EHV-1阴性、阳性血清、gD抗原由新疆农业大学动物医学学院传染病实验室保存；甲型流感病毒感染马阳性血清、阴性血清、马流感抗原由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供。

本实验室于2019 年从新疆乌鲁木齐市新市区、高新区、米东区、南山景区、乌鲁木齐县、达坂城5个地区，采用多阶段随机抽样法[12]，采集无EHV-1、EAV、EIV 疫苗接种史的马血清样品共676 份，分离血清-80 ℃保存。

1.2 主要试剂TMB 显色液购自北京索莱宝科技有限公司；兔抗马IgG-HRP 购自Bethyl 公司；马动脉炎病毒ELISA 抗体检测试剂盒INGEZIM-ARTERITIS购自西班牙雅雷萨INGENASA 公司；ELISA 酶标板购自NUNC 公司。

1.3 EHV-1、EAV、EIV 的血清学检测方法采用新疆农业大学动物医学学院传染病实验室建立的间接ELISA 方法检测样品中EHV-1 的抗体[13]；结果判定，样品OD450nm值>0.319 判为阳性，OD450nm值 0.319 判为阴性；采用INGEZIM-ARTERITIS 试剂盒（间接ELISA 法）检测样品中EAV 的抗体；采用中国农业科学院哈尔滨兽医研究所建立的血凝抑制试验（HI）检测样品中EIV 的HI 抗体[14]。

1.4 数据统计与分析采用统计分析软件SPSS 20.0对乌鲁木齐不同地区、年龄、性别及品种马的EHV-1、EAV 和EIV 抗体阳性率进行卡方分析。

2 结 果

2.1 不同地区马EHV-1、EAV、EIV 血清抗体检测结果对2019 年新疆乌鲁木齐地区采集的676份马血清样品进行3种马病毒抗体的检测。结果显示，EHV-1、EAV、EIV 及EHV-1+EIV 平均抗体阳性率分别为39.35%（266/676）、 0、 40.53%（274/676）、 24.85%（167/676）；其中，南山景区、乌鲁木齐县、达坂城区马EHV-1 的抗体阳性率分别为44.44%（72/162）、57.89%（88/152）、66.67%（52/78），显著高于新市区16.00%（32/200） 和米东区26.19%（22/84）（p<0.05）；米东区、南山景区、乌鲁木齐县、达坂城区马EIV 的抗体阳性率分别为58.00%（58/84）、57.00%（57/162）、47.37%（95/152）、41.03%（32/78），显著高于新市区16.00%（32/200）（p<0.05）；新市区、米东区马EHV-1+EIV 抗体阳性率分别为11.00%（22/200）、19.05%（16/84），显著低于其它3 个地区（p<0.05）（表1）。表明马群感染EHV-1、EIV 存在地区差异，县城（南山景区、乌鲁木齐县、达坂城区）与市区马群（新市区、米东区）抗体阳性率差异显著。

表1 乌鲁木齐不同区域马血清抗体检测结果Table 1 Antibody test results of horse serum samples in different regions of Urumuqi

2.2 不同年龄马EHV-1、EIV 血清抗体检测结果

对676份不同年龄的马血清抗体水平进行统计分析。结果显示，不同年龄马EHV-1 抗体阳性率在26.05%～50%，EIV抗体阳性率在33.61%～77.50%，EHV-1+EIV抗体阳性率在14.29%～32.50%。其中1 岁以内马驹EHV-1、EIV 及EHV-1EIV 抗体阳性率最高，分别为50.00%（20/40）、77.50%（31/40）、32.50%（13/40），显著高于其它年龄的马（p<0.05）；10 岁以上马EHV-1、EIV 及EHV-1+EIV 抗体阳性率最低，分别为26.05%（31/119）、33.61%（40/119）、14.29%（17/119）（表2）。表明马群感染EHV-1 和EIV 存在年龄差异，1 岁以内马驹与其它年龄马抗体阳性率差异显著。

表2 不同年龄马血清抗体检测结果Table 2 Antibody test result of horse serum at different ages

2.3 不同性别马EHV-1、EIV血清抗体检测结果对676份不同性别的马血清抗体水平统计分析结果显示，母马EHV-1、EIV 的抗体阳性率分别为54.21%（58/107）、67.29%（72/107），显著高于公马36.56%（208/569）、35.50%（202/569）（p<0.05）；母马EHV-1+EIV抗体阳性率为14.02%（15/107），显著低于公马26.89%（153/569）（表3）。表明马感染EHV-1和EIV 存在性别差异，母马与公马EHV-1、EIV抗体阳性率差异显著。

2.4 不同品种马EHV-1、EIV 血清抗体检测结果

对676 份不同品种的马血清抗体水平统计分析结果显示，哈萨克马EHV-1、EIV 及EHV-1+EIV 抗体阳性率最高，分别为54.95%（200/364）、54.67%（199/364）、35.71%（130/364），显著高于其他品种的马（p<0.05）；除混血马外其余品种的马均有不同程度的EIV 感染；其中伊犁马EIV 和EHV-1+EIV 抗体阳性率最低，均为9.09%（2/22），显著低于其它品种的马（p<0.05）；混血马无EIV 感染，其余品种的马均有不同程度的EIV 感染（表4）。表明马感染EHV-1 存在品种差异，本土马（哈萨克马、伊犁马）与纯血马、混血马抗体阳性率差异显著。

表3 不同性别的马血清抗体检测结果Table 3 Antibody test result of horse serum for different genders

表4 不同品种的马血清抗体检测结果Table 4 Serum antibody test results of different breeds of horses

3 讨 论

马业是一个庞大且经济多样化的行业。随着近几年赛马业的国际化交流日益增多，马及其产品的流动也越来越频繁，据联合国粮食及农业组织（FAO）统计，2017 年底全球180 个国家及地区养马总数达6056.66 万匹[15]；2018 年底，新疆马存栏量73万匹，居全国之首[16]。而近年来EHV-1、EAV 和EIV 的传播范围和速度也在不断的扩大和加快，严重威胁着我国马业的健康发展[17]。

经本实验室统计结果显示，采集的676 份马血清样品中，未检测到EAV 抗体；EHV-1、EIV 及EHV-1+EIV 抗体阳性率分别为39.35%（266/676）、40.53%（274/676）、24.85%（168/676），均高于2016 年沙燕等检测新疆伊犁地区马的相应抗体阳性率[18]：15.16%（42/277）、24.19%（67/277）、3.61%（10/277）。

乌鲁木齐地区马存在不同程度的EHV-1 和EIV感染，且流行差异显著，其中县城马的抗体阳性率显著高于市区马。这可能与不同地区马场的饲养规模、管理水平及环境条件的不同有关。市区马多为规模化养殖，饲养管理水平相对校高，环境条件较好，而县城马则偏多于散养。表明散养马比规模化养殖马更易感染EHV-1 和EIV，良好的饲养环境更有利于这2 种马病的防控[19]，应当加强和改善县城地区对散养马的饲养管理水平和饲养条件，并根据这两种传染病的疫苗接种特性及免疫周期的不同，因地制宜的制定合理的免疫程序。

不同年龄的马均可感染EHV-1 和EIV，其中1岁以内的马驹EHV-1、EIV 抗体阳性率最高，与其他研究结果一致[20-21]。这可能与其体内的母源抗体伴随马驹断奶，母源抗体消失有关。1 岁以内马驹更易感EHV-1、EIV，应当重视和加强对其的饲养管理和免疫接种工作，对易感幼驹实时监控，适当增强其机体抵抗力。

不同性别的马均有EHV-1 和EIV 感染，母马EHV-1、EIV 抗体阳性率显著高于公马。表明母马比公马更易于感染这2 种病，可根据不同性别的马，制定不同的免疫程序，特别是孕马，对于抗体阳性率较低的母马，要定期对其进行免疫监测并补种疫苗，避免出现流产或死胎等现象。不同品种的马均存在EHV-1 感染，其中本土品种哈萨克马EHV-1、EIV及EHV-1+EIV抗体阳性率显著高于纯血马和混血马；除混血马外其余品种的马均有不同程度的EIV 感染。这可能与不同品种马的个体差异有关，地区间引进不同来源和品种的马，决定该地区EHV-1和EIV的流行不同[22]。本土马比纯血马和混血马易于感染这2种病，应当引起重视，并加强对本土马的免疫监控和饲养管理，及出入境马的EHV-1监测工作。

研究结果表明，新疆乌鲁木齐地区马存在不同程度的EHV-1、EIV 感染，不同地区、年龄、性别及品种的马EHV-1、EIV 感染率差异显著，应当引起重视，并加强和完善各马场的饲养管理和免疫监控。通过血清流行病学调查，本研究为该地区这3种马病的研究和防控提供数据参考，对促进新疆马产业的健康发展具有重要意义。