十八味消白丸的质量测定方法探讨

肖琼

（山西省中西医结合医院 山西 太原 030013）

十八味消白丸是由当归、黄芪、熟地黄、白术等十八味中药组成的复方。主治白癜风。本次使用的高效液相色谱法对西洋参中所含有的人参皂苷Rb1 进行含量鉴定，实验过程如下。

1.实验仪器与试药

WATERS2695 高效液相色谱仪；AlltechELSD2000ES 检测器；DiamosilC18 色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；超声波清洗器；恒温水浴锅；JM-B10002 千分之一电子天平；HANGPING-FA2104万分之一电子分析天平；微量进样器。

人参皂苷Rb1 对照品、川芎对照药材、当归对照药材、石菖蒲标准品、黄芪甲苷、大黄素标准品均购自中国药品生物制品检定所。十八味消白丸，阴性对照品（自制）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他均为分析纯。

2.定性鉴别

2.1 当归、川芎的定性鉴别

准确提取本品5g 研细，加甲醇15mL，超声处理15 分钟，然后过滤，将滤液蒸干，将试验残渣加入甲醇帮助溶解，以此为供试品溶液；另取当归、川芎对照药材各0.5g，按照上述同样方法制作对照溶液；提取、当归各5g，按照供试品溶液制作方法制作，作为阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，提取上述溶液各5μL，分开点在同一个硅胶G 薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，先展开，后取出，再晾干，放置在紫外光灯（365nm）下观察，供试品色谱中，在与对照药材相对的地方上出现类似的荧光斑点，图谱清晰可见，阴性对照无干扰。

2.2 何首乌的定性鉴别

提取本品5g，研磨，先加入2.5mol/L 硫酸15mL，再加入氯仿15mL，然后进行加热回流15 分钟，离心，取上清液放置于分液漏斗中，分取氯仿层，蒸干，试验残渣加氯仿1mL 使溶解，作为供试品溶液[1]。再提取大黄素对照品，加入甲醇制成每3mL中需含3mg 的溶液，作为对照品溶液。取何首乌阴性药材10g，同供试品溶液制备方法制备，作为阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μL，区分点在同一硅胶G 薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇（30:10:0.5）为展开剂[2]，先展开，然后取出，晾干，放置在紫外光灯（365nm）下进行检查。供试品色谱中，在和对照品色谱相对应的地方，显示相同颜色的荧光斑点，图像清晰，阴性对照无干扰。

2.3 石菖蒲的定性鉴别

取本品20g 研细，加石油醚（60 ～90oC）30mL，然后进行加热回流半个小时，再滤过，将滤液蒸干，最后加入石油醚1mL进行溶解，作为供试品溶液；再取石菖蒲的对照药材1g，使用同样的方法制成石菖蒲对照药材溶液；取石菖蒲阴性对照药材10g，同供试品溶液制作方法进行制作，用作石菖蒲阴性对照溶液。依据薄层色谱法为展开剂[3]，分别展开、取出和晾干，常规放置1 小时，再放置于紫外光灯下（365nm）下进行观察，供试品色谱中，在和对照品色谱相对应的位置上，呈现相同的颜色的荧光斑点，图像清晰，阴性对照无干扰。

2.4 黄芪的定性鉴别

提取本品5g 研磨，然后加甲醇15mL，进行回流半个小时小时，滤过，滤液蒸干，加水10mL 将其溶解，用水饱和正丁醇萃取1 次，一次10mL，取正丁醇液，用氨水萃取1 次，一次10mL，取正丁醇层，使其挥干，加甲醇1mL 使其溶解，作为供试品溶液。另外提取黄芪甲苷对照品，加入甲醇制成每1mL 含1mg的对照品溶液；提取黄芪阴性药材10g，和供试品溶液制作方法制作，为黄芪阴性对照溶液。依照薄层色谱法进行试验，分别展开、取出和晾干，提取上述三种溶液各4μL，区别点在同一硅胶G 薄层板上，用三氯甲烷-甲醇-水（13:7:2）的下层作为展开剂，展开、取出和晾干，供试品色谱中，在和对照品色谱相对应的位置上，显示相同的颜色的荧光斑点，图谱清晰，阴性对照无干扰。

3.含量测定

3.1 色谱条件

使用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂;使用乙腈-水（30:70）作为流动相；柱温度：30℃；流动相对流速：1.0mL/min；载气流速：2.1L/min；漂移管温度：110℃；理论塔板数：使用人参皂苷Rb1 峰进行计算应不得低于5000。

3.2 对照品溶液的制作

精密称取人参皂苷Rb1对照品剂量，加入甲醇制作成每1mL含有人参皂苷Rb11mg 的溶液，得到对照品溶液。

3.3 供试品溶液的制作

提取本品2g 研磨，精密称定计算，置于具塞锥形瓶中，精确加入水饱和正丁醇50mL，封闭，称其质量，超声处理45 分钟，使其冷却，再称定重量，用水饱和正丁醇弥补减少的重量，过滤，精确量取20mL 置分液漏斗中，加入氨试液20mL 萃取2 次，弃掉氨试液，正丁醇液蒸干，加入甲醇定容至4mL，即得。

3.4 阴性对照溶液的制作

处方中除去西洋参，根据供试品溶液的制作方法制作阴性对照品溶液。

3.5 阴性干扰试验

提取上述溶液各5μL，区别按照上述色谱条件进样进行分析，观察色谱图变化，试验结果显示，阴性对照图谱与对照品、供试品图谱中西洋参相对应的保留时间如果无色谱峰，表示选择性良好，阴性无干扰。

3.6 线性关系考察

见表1。

表1 线性关系

3.7 精密度实验

吸取同一份对照品溶液（0.916mg/mL），持续进样6 次，根据上述色谱进行测试。结果，RSD=2.18%（n=6），表示仪器精密度很准确。

3.8 重复性实验

见表2。

表2 重复性实验

3.9 稳定性试验

提取一样的供试品溶液，依据上述色谱分别在2、4、6、8、10、12 小时测定人参皂苷Rb1 峰面积积分值。结果，RSD=2.06%（n=6），表示在12 小时内供试品溶液稳定性较为良好。

3.10 加样回收率实验

取已知含量的十八味消白丸粉末6 份，每份约1.0g，精密称定，分别精确加入人参皂苷Rb1 对照品（0.912mg/mL）2mL，混合后按供试品的制备方法提取，各进样10μL 检测，记录相关数据，计算结果，人参皂苷Rb1 平均回收率为100.42%，RSD为1.69%（n=6）。

3.11 含量测定

照3.3 项下方法平行提取两份供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液（0.912mg/mL）5μL、10μL,供试品溶液20μL，依照上述色谱条件进行测试，以外标法计算，结果为1.666mg/g、1.419mg/g，平均含量为1.52mg/g。

4.讨论

药典中西洋参人参皂苷Rb1的含量测定方法为高效液相色谱法，采用紫外检测器，但是由于人参皂苷Rb1在紫外检测条件下为末端吸收，灵敏度低，干扰较大，重复性较差，故本方不采用药典的方法。因用HPLC-ELSD 法测量人参皂苷Rb1的含量具有简便、准确、灵敏度高、现性好等特点，是一种良好的测定含参皂苷Rb1制剂的含量测定方法，故采用此法测定人参皂苷Rb1的含量。

本文使用的对于十八味消白丸的定性和定量检测方法，本文方法具有准确稳定性、重现性良好，并且阴性无干扰，各项指标皆达到满意的效用，可用于十八味消白丸的质量控制。