恙虫病东方体感染对内皮细胞Tie2/Akt/Foxo1通路的影响

卫 阳，金迎迎，梁越进，邢 燕,4

恙虫病东方体(Orientiatsutsugamushi)是引起恙虫病的病原微生物，是一种脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)缺乏的革兰氏阴性菌，专性细胞内生存并可在感染的内皮细胞中自由复制[3]。位于组织和循环系统之间的内皮细胞(Endothelial cell，EC)层是炎症细胞运转的关键界面，内皮细胞间连接和血管泄漏密切相关。血管渗透性过高是急性炎症最重要的特征，细胞及体液免疫效应因子可利用血管泄漏进入感染或受损位置，引起宿主器官功能紊乱及休克等不良后果[4-5]。Tie2是一种跨膜内皮细胞酪氨酸激酶受体，是细胞间连接的一个重要分子，可调控血管形成及内皮细胞炎症和通透性。血管生成素(Angiopoietin, Ang)1和2是重要的Tie2的配体[6]。Ang1由内皮旁细胞产生，起激动作用，结合Tie2使其磷酸化，并通过Akt/Foxo1通路以维持血管完整性，抑制血管的泄漏、炎症因子的表达以及白细胞的招募和转移的作用；Ang2由内皮细胞自身产生，与Ang1竞争性地结合Tie2而对Tie2磷酸化起抑制作用，导致损伤和血管泄漏[7]。然而，有研究显示在无菌条件下，Ang2对Tie2信号有激活作用[8]。恙虫病东方体感染对宿主内皮细胞Tie2/Akt/Foxo1信号通路的具体影响尚不清楚。

本研究通过动物及内皮细胞感染实验，检测Tie2/Akt/Foxo1信号通路关键蛋白的表达和磷酸化水平、炎症因子和细胞通透相关蛋白的表达，以分析在恙虫病东方体感染宿主过程中，Tie2信号的变化及影响，为恙虫病的防治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1细菌培养及分离 恙虫病东方体Karp株(OrientiatsutsugamushiKarpstrain，OtK)在 Vero E6 细胞(猴肾细胞系)中培养增殖。该实验在UTMB加尔维斯顿国家实验室的动物生物安全3级实验室(ABSL3 facility)进行。……