德国小蠊Bla g 5基因表达、纯化及生物信息学分析

季树宇，欧阳春艳，曹 会，钟永浩，杨礼腾，刘晓宇

德国小蠊，属蜚蠊目姬蠊科，为蜚蠊目中分布最为广泛、与人类生活最为密切的一类医学昆虫，广泛分布于全球热带、亚热带、温带中低海拔湿润地区[1]，在我国大部分省市均有广泛分布。其排泄物、分泌物、尸体及皮蜕通过吸入途径可引起I型超敏反应，进而诱发过敏性哮喘、过敏性鼻炎和过敏性皮炎等疾病[2-3]，据季文霞等人的调查显示四川绵阳地区吸入性过敏原阳性结果前五位的分别是蟑螂、粉尘螨、屋尘螨、藜、大豚草[4]，由此可见，蟑螂为重要吸入性过敏原疾病之一，其阳性率高达42.2%。李春林等人在海南对500例过敏性疾病患者，采用皮肤点刺试验及鼻黏膜激发试验，其中皮肤点刺试验阳性率为66.20%，而鼻黏膜激发试验阳性率为100%[5]。国内对德国小蠊过敏原Bla g 5尚未见报道，故本研究通过基因重组技术将德国小蠊主要过敏原Bla g 5基因导入大肠杆菌，通过纯化最终得到纯度较高的重组蛋白，为临床诊断过敏性疾病试剂研发、精准脱敏治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂、仪器

1.1.1表达载体与菌种E.coli感受态细胞Rosetta(DE3)及载体pET-32a(+)均由深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所保存。

1.1.2血清 过敏患者由深圳市龙岗耳鼻喉医院提供，血清采集均获得供血者知情同意。对20 例过敏性哮喘和过敏性鼻炎患者行静脉穿刺，采血 5 mL，分装后低温-80℃保存。

1.1.3主要试剂 限制性核酸内切酶BamHI、XhoI，Taq DNA聚合酶，T4 DNA连接酶均购自日本TaKaRa 公司；Ni-NTA柱填料购自广州佰路生物科技有限公司；……