18β-甘草次酸新衍生物对HaCaT细胞增殖的影响

罗丽梅 李 创 丁 锐 胥秀英 郑一敏

1重庆化工职业学院制药工程学院，重庆，401120；2重庆大学环境与生态学院，重庆，400030；3 重庆理工大学，重庆，400054

甘草次酸(GA)是豆科植物甘草的有效成分之一，有抗炎、抗过敏、抗肿瘤、免疫调节等多种药理作用[1]，临床上也用于银屑病治疗[2]。18β-3-O-(5-甲基吡嗪-2-甲酰)-甘草次酸(GA2)是甘草次酸新衍生物，与甘草次酸相比有更好的油水分配性。银屑病(psoriasis)，是一种以真皮慢性炎症与表皮过度增生为特征的自身免疫性皮肤病[1]，有“不死的癌症”之称[2]，病理表现为角质形成细胞(keratinocyte, KC)的过度增殖和炎症细胞浸润，严重影响患者的身心健康[3，4]。HaCaT细胞是自发永生化的人角化细胞系，已广泛用于银屑病的研究[5]。本文开展了GA2对HaCaT细胞增殖抑制作用和诱导HaCaT细胞凋亡的体外研究，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 实验材料 HaCaT细胞(购自美国ATCC库)，GA2(由实验室合成，纯度≥99%，有关结构及确证另文发表)，DMEM(美国Hyclone公司)，CCK8(日本同仁化学研究所)，EdU、Annexin V-FITC试剂盒、免疫染色固定液、Caspase 3活性检测试剂盒、Bradford蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物技术有限公司)，结晶紫(成都市克隆化工试剂厂)。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养 参考文献将HaCaT细胞接种于含10%胎牛血清，100 U/mL青链霉素的DMEM培养基中，置于37℃，5%的CO2孵箱培养[6]。

1.2.2 细胞增殖检测 采用0～150 μM GA2分别处理HaCaT细胞24 h，根据抑制率计算IC50选择31.2、62.5、125 μM GA2分别作为后续试验药物作用浓度。采用CCK-8、EdU法[7，8]检测GA2对处于对数生长的HaCaT细胞的增殖抑制作用。以5×104/mL接种于96孔板，每孔90 μL，24 h弃培养基分别加入含31.2、62.5、125 μΜ的GA2培养基，复3孔，同时设置125 μΜ的阳性药维A酸(Retinoid acid)组、125 μΜ的原料药GA组和Control空白对照组。……