安 阳,马武开,黄 颖,曹跃朋,宁乔怡,刘 静,杨庆万,项飞燕
(1.贵州中医药大学第二附属医院,贵州 贵阳 550003;2.贵州省遵义市第一人民医院,贵州 遵义 563000)
类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种以反复发作的四肢对称性多关节肿胀、疼痛、功能障碍甚至关节畸形为特点的慢性自身免疫性疾病,基本病理表现为慢性滑膜炎。研究认为白介素17(Interleukin 17,IL-17)与RA的疾病进程紧密相关[1],它主要由辅助性T细胞17(T Helper 17 cell,Th17)分泌,而信号转导与转录激活因子3(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)则通过调控核基因转录,控制着Th17的分化与成熟,并由此调控多种下游细胞因子如IL-6、IL-17、IL-21、IL-22、TNF-α等的表达[2],最终形成STAT3-Th17正反馈通路,使炎症信号逐渐放大。因此,针对STAT3的靶向调控,即可下调Th17的分化,有效控制RA的滑膜炎症。松杖方是民间侗医药经验方,用于临床中取得较好疗效[3-4]。本研究通过松杖方的兔含药血清干预的方法,观察对人RAFS中STAT3及相关蛋白孤核受体γt(Orphan nuclear receptor gammat,ROR-γt)、细胞因子信号转导抑制分子3(Suppressor of cytokine signaling-3,SOCS-3)的影响,探讨松杖方的抗炎作用机制。
1.1 实验材料
1.1.1 滑膜细胞来源:滑膜组织取自贵州中医药大学(原贵阳中医学院)第二附属医院骨科行关节置换术及我科行关节镜诊疗术的RA患者,标本的获取均通过患者知情同意。RA 的诊断符合ACR1987 年分类标准或EULAR2010年分类标准,并除外合并有感染、肿瘤、其他风湿病等情况,3个月内未使用慢作用抗风湿药。
1.1.2 试剂及药物:松杖方由松萝、虎杖组成,两药各等分。雷公藤多苷(贵州汉方制药有限公司);来氟米特片(苏州长征-欣凯制药有限公司);DMEM 高糖培养基(HyClone);胰酶(HyClone);……